波動性甘油三酯水平及高糖聯(lián)合培養(yǎng)對人臍靜脈內(nèi)皮細胞的損傷作用.pdf

1、目的:通過體外研究模擬餐后甘油三酯異常以及伴有的血糖異常對人臍靜脈內(nèi)皮細胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）的損傷作用，探討餐后狀態(tài)下甘油三酯、甘油三酯波動、高血糖并存對血管內(nèi)皮的損傷作用。
　　方法:
　　1、以人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）為研究對象，體外培養(yǎng)至第六代并應用不含血清的1640完全培養(yǎng)基饑餓24小時已達到同步化后用于試驗。
　　2、從醫(yī)院收集人的

2、正常血清及高甘油三酯血清(HTGBS)并配比為所需濃度，并進行除菌、滅活處理。其他指標配比為相近濃度。血清中的甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、葡萄糖(GLU)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)等指標均由醫(yī)院檢驗科全自動生化分析儀檢測。分裝并儲存在-80℃冰箱中。
　　3、實驗共10組，給予以下條件，共作用3天。1組:葡萄糖濃度5.5mmol/L+TG1.56 mmol/L。2組:葡萄糖濃度5.5 mmol/L+TG

3、3.45mmol/L，3組:葡萄糖濃度5.6 mmol/L+TG5.52 mmol/L，4組:葡萄糖濃度5.5 mmol/L+TG1.56 mmol/L（8小時）與3.45 mmol/L（16小時）交替，5組:葡萄糖濃度5.5 mmol/L+TG1.56 mmol/L（8小時）與5.52mmol/L（16小時）交替，6組:葡萄糖濃度25 mmol/L+TG1.56 mmol/L，7組:葡萄糖濃度25 mmol/L+TG3.45 mmol

4、/L，8組:葡萄糖濃度25mmol/L+TG5.52 mmol/L，9組:葡萄糖濃度25 mmol/L+TG1.56 mmol/L（8小時）與3.45 mmol/L（16小時）交替，10組:葡萄糖濃度25 mmol/L+TG1.56 mmol/L（8小時）與5.52 mmol/L（16小時）交替。結(jié)束后換用葡萄糖濃度5.5 mmol/L+TG1.56 mmol/L培養(yǎng)8小時，測定各組細胞活力(MTT)指標，收取上清液測單核細胞趨化蛋白(

5、monocytechemoattractant protein-1，MCP-1)、血管內(nèi)皮細胞間粘附分子vascular cell adhesion molecule，VCAM-1）、細胞間粘附分子(interscular celladhesionmolecule，ICAM)、C反應蛋白（C-reactive protein，CRP）、丙二醛malondiadehyde，MDA）、超氧化物歧化酶(superoxide sismutase

6、，SOD)、一氧化氮(nitric oxide，NO)。
　　4、統(tǒng)計學分析:符合正態(tài)分布計量資料以(x)±s表示，采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學分析，多組間數(shù)據(jù)比較用單因素方差分析，兩兩比較用LSD檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:
　　1、MTT:中濃度甘油三酯波動組大于高濃度波動組的OD值(P＜0.05)。相同葡萄糖濃度情況下，與低濃度甘油三酯組比較，持續(xù)中濃度甘油三酯組OD值升高，而持續(xù)高濃

7、度甘油三酯組OD值降低。在相同的甘油三酯作用下，高糖組要比低糖組的OD值低，單純高糖組的OD值大于單純高濃度甘油三酯組而小于單純中濃度高甘油三酯組，而高濃度葡萄糖與高濃度甘油三酯聯(lián)合培養(yǎng)組含量最低。同等程度的甘油三酯波動，高糖組的OD值要低于低糖組。
　　2、上清液CRP水平:相同葡萄糖濃度下，持續(xù)高甘油三酯及波動性高甘油三脂組測得CRP均數(shù)均高于低甘油三酯組。在低葡萄糖濃度組，與低濃度甘油三酯組相比，其他各組CRP均升高，甘油三

8、酯波動組較等水平的高甘油三脂組低，但無明顯差別。在聯(lián)合高濃度葡萄糖組中，與低濃度甘油三脂組相比，其他各組CRP升高，但波動性甘油三酯組較其無明顯差異。在同等甘油三酯水平下，高糖組CRP較低糖組高。單純高糖組CRP較單純高濃度甘油三酯組的CRP低，而高濃度葡萄糖與高濃度甘油三酯聯(lián)合培養(yǎng)組含量最高。同等程度的甘油三酯波動，高糖組的CRP含量要大于低糖組。
　　3、上清液ICAM含量:相同葡萄糖濃度下，持續(xù)高甘油三酯及波動性高甘油三脂組

9、測得ICAM均數(shù)均高于低甘油三酯組。在低葡萄糖濃度組，波動性中濃度甘油三酯組與低濃度甘油三酯組相比無明顯差異，其他各組ICAM與其相比均明顯升高。在聯(lián)合高濃度葡萄糖組中，與低濃度甘油三脂組相比，持續(xù)高甘油三脂組ICAM均數(shù)升高，但波動性甘油三酯組較其無明顯差異。在同等甘油三酯水平下，高糖組ICAM較低糖組高。單純高糖組ICAM較單純高濃度甘油三酯組的ICAM低，而高濃度葡萄糖與高濃度甘油三酯聯(lián)合培養(yǎng)組含量最高。同等程度的甘油三酯波動，高

10、糖組的ICAM含量要大于低糖組。
　　4、上清液VCAM含量:相同葡萄糖濃度下，持續(xù)高甘油三酯及波動性高甘油三脂組測得VCAM均數(shù)均高于低甘油三酯組。在低葡萄糖濃度組，波動性高濃度甘油三酯組和持續(xù)高濃度甘油三酯組與低濃度甘油三酯組相比明顯升高，其他各組VCAM與其相比無明顯差異。在聯(lián)合高濃度葡萄糖組中，與低濃度甘油三脂組相比，波動性中濃度甘油三酯組較其無明顯差異，而其他組較其明顯升高。在同等甘油三酯水平下，高糖組CVAM較低糖組高

11、。單純高糖組VCAM較單純高濃度甘油三酯組的VCAM低，而高濃度葡萄糖與高濃度甘油三酯聯(lián)合培養(yǎng)組含量最高。同等程度的甘油三酯波動，高糖組的VCAM含量要大于低糖組。
　　5、上清液MCP-1含量:相同葡萄糖濃度下，持續(xù)高甘油三酯及波動性高甘油三脂組測得MCP-1均數(shù)均高于低甘油三酯組，波動性高濃度甘油三酯組和持續(xù)高濃度甘油三酯組與低濃度甘油三酯組相比明顯升高，其他組MCP-1與其相比無明顯差異。在高濃度葡萄糖組中，持續(xù)高濃度甘油三

12、酯組與低濃度甘油三酯組比較明顯升高，其他組較其無明顯差異。在同等甘油三酯水平下，高糖組MCP-1較低糖組高。單純高糖組MCP-1較單純高濃度甘油三酯組低，而高濃度葡萄糖與高濃度甘油三酯聯(lián)合培養(yǎng)組含量最高。同等程度的甘油三酯波動，高糖組的MCP-1含量要大于低糖組。
　　6、上清液MDA含量:相同葡萄糖濃度下，持續(xù)高甘油三酯及波動性高甘油三脂均可不同程度增加上清液中炎性產(chǎn)物MDA的表達。但波動性甘油三脂組較其無明顯差異。在同等甘油三

13、酯水平下，高糖組MDA較低糖組高。單純高糖組MDA較單純高濃度甘油三酯組低，而高濃度葡萄糖與高濃度甘油三酯聯(lián)合培養(yǎng)組含量最高。同等程度的甘油三酯波動，高糖組的MDA含量要大于低糖組。
　　7、在相同葡萄糖濃度下，持續(xù)高甘油三酯及波動性高甘油三脂均可降低上清液中保護性因子SOD、NO含量，在低葡萄糖濃度組，各組與低濃度甘油三酯組相比明顯降低。在聯(lián)合高濃度葡萄糖組中，與低濃度甘油三脂組相比降低，但波動性高濃度甘油三酯組和持續(xù)高濃度甘油

14、三酯組較其明顯降低。在同等甘油三酯水平下，高糖組NO和SOD較低糖組低。單純高糖組NO、SOD較單純高濃度甘油三酯組高，而高濃度葡萄糖與高濃度甘油三酯聯(lián)合培養(yǎng)組含量最低。同等程度的甘油三酯波動，高糖組的SOD、NO含量要大于低糖組。
　　結(jié)論:
　　1、在相同葡萄糖濃度時，波動性甘油三酯和持續(xù)中濃度甘油三酯均促進細胞增殖，且低糖并中濃度甘油三酯波動的促增殖作用最大，持續(xù)高濃度甘油三酯均抑制細胞增殖，且高糖聯(lián)合持續(xù)高濃度甘油三

15、酯的抑制細胞增殖的作用最強。單純高濃度甘油三脂對細胞增殖的抑制作用大于單純高糖。
　　2、波動性高甘油三酯和持續(xù)高甘油三酯對人臍靜脈內(nèi)皮細胞均有炎性損傷，但波動性高甘油三酯對細胞的損傷不大于持續(xù)高甘油三酯。單純高水平的高甘油三脂對細胞的損傷作用大于單純高糖，高糖聯(lián)合持續(xù)高濃度的甘油三酯對細胞的作用最大，同等甘油三酯波動時，高葡萄糖的炎性損傷作用大于低葡萄糖。
　　3、波動性高甘油三酯和持續(xù)高甘油三酯導致人臍靜脈內(nèi)皮細胞抗氧化

16、能力減弱;但波動性高甘油三酯對細胞抗氧化能力的影響不大于持續(xù)高甘油三酯。單純高水平的高甘油三脂對細胞的抗氧化能力的減弱作用大于單純高糖，高糖聯(lián)合持續(xù)高濃度的甘油三酯對細胞的抗氧化能力的減弱作用最大。同樣的甘油三酯波動時時，高葡萄糖的炎性損傷作用大于低葡萄糖。
　　4、波動性高甘油三酯和持續(xù)高甘油三酯導致人臍靜脈內(nèi)皮細胞功能損傷（NO含量降低），但波動性高甘油三酯對細胞的影響不大于持續(xù)高甘油三酯。單純高水平的高甘油三脂對細胞內(nèi)皮功能