版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、單核細胞增生性李斯特氏菌(Listeria Monocytogenes,LMO)是李斯特氏菌屬的重要成員,屬于細胞內(nèi)寄生的革蘭氏陽性桿菌.該菌在病原學上作為一種重要的人畜共患和食源性疾病的病原菌在公共衛(wèi)生學上有重要意義,近幾年已在許多國家報道由LMO引起的李斯特氏菌病及食物中毒.本菌可致人和動物患腦膜炎、敗血癥、腦膜腦炎、流產(chǎn)等,發(fā)病率雖低,但死亡率高達30﹪~70﹪.Hemolysin(hly)基因是LMO的毒力標志基因,屬于巰基活化
2、的結(jié)合膽固醇的細胞溶血素家族,是LMO必要的致病因子.該實驗根據(jù)GeneBank已發(fā)表的LMO hly完整基因序列,設(shè)計并合成分別帶有SalI和XbaI酶切位點的上下游引物TU、TL,以LMO 0586株總DNA為模板,應(yīng)用PCR技術(shù),擴增得到hly全基因.將純化的該基因片段克隆到pMD18-T載體中,通過單雙酶切及PCR鑒定篩選帶有插入片段的陽性重組質(zhì)粒,命名為pMD18-T-hly.對克隆的hly基因進行序列測定,測序結(jié)果顯示LMO
3、 0586 hly基因全長1646bp,含有完整的開放閱讀框架,編碼529個氨基酸.運用DNAMAN軟件將測序結(jié)果與國外報道的LMO F6789株、LMO F2365株進行同源比較,結(jié)果顯示,核苷酸序列同源性分別為99.70﹪和99.39﹪.推導出的氨基酸序列與其相應(yīng)菌株比較,同源性分別為99.82﹪和98.90﹪.以重組質(zhì)粒pMD18-T-hly為模板,重新設(shè)計并合成分別含有BamHI、XhoI酶切位點的上下游引物PU、PL,通過PC
4、R擴增hly基因,然后將其定向克隆到原核表達載體質(zhì)粒pGEX-6P-1的BamHI與XhoI之間,命名為pGEX-6P-hly.將鑒定的陽性重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細胞BL21(DE<,3>)中.挑選含重組質(zhì)粒的菌落,經(jīng)IPTG(1.0mmol/L)誘導后,經(jīng)SDS-PAGE分析,目的蛋白與谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(GST大小約為26ku)融合后的重組蛋白大小約為72ku.光密度掃描對表達產(chǎn)物進行初步定量表明,72ku融合蛋白占菌體總蛋白的
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 單核增生性李斯特氏菌溶血素分段表達及單克隆抗體的制備.pdf
- 產(chǎn)單核細胞李斯特菌PCR檢測方法的建立及溶血素基因的克隆與表達.pdf
- 單核細胞增生李斯特菌檢驗
- LAMP和PCR檢測單核細胞增生性李斯特氏菌的研究.pdf
- 食品中單核細胞增生李斯特氏菌及其檢驗
- 食品中單核細胞增生性李斯特氏菌PCR快速檢測方法的建立.pdf
- 熒光定量PCR檢測豬肉中單核細胞增生性李斯特氏菌的研究.pdf
- 食品中單核細胞增生李斯特氏菌的毒力研究.pdf
- 單核細胞增生性李斯特桿菌單克隆抗體的制備.pdf
- 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗培養(yǎng)基和試劑
- 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗培養(yǎng)基和試劑
- 單核細胞增生性李斯特菌牧場劃性抗體的制備研究.pdf
- 單核細胞增生性李斯特菌適配子的篩選及其初步應(yīng)用.pdf
- 10 mL體系免疫磁富集單核細胞增生性李斯特菌的研究.pdf
- 核增生李斯特氏菌檢測概述
- 單核增生李斯特氏菌檢測概述概述
- 產(chǎn)單核細胞李斯特菌hly和actA基因的原核表達及其產(chǎn)物的單克隆抗體研制.pdf
- 食源性單核增生性李斯特氏菌毒力基因分布及致病力的研究.pdf
- 單核細胞增生李斯特氏菌膠體金免疫層析方法的建立.pdf
- 單核細胞增生性李斯特氏菌種、株隨機擴增DNA多態(tài)性研究.pdf
評論
0/150
提交評論