山東省食品中單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌耐藥性與分子分型研究.pdf

1、研究背景：
　　單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,以下簡稱單增李斯特氏茵),為革蘭氏陽性無芽孢桿菌,是一種重要的食源性人畜共患病原菌。據(jù)報(bào)道,單增李斯特氏菌在歐洲及美國的發(fā)病率為0.2～0.8/100000,但其病死率卻高達(dá)20～70%,國際各衛(wèi)生研究機(jī)構(gòu)已經(jīng)對此給予了高度關(guān)注。單增李斯特氏菌在自然界中分布廣泛,人類主要通過接觸即時(shí)食品和冷凍食品發(fā)生感染。人類感染后的臨床癥狀主要表現(xiàn)為敗血癥,

2、腦膜炎,單核細(xì)胞增多及自發(fā)性晚期流產(chǎn)等,孕婦、新生兒、老人及免疫缺陷者為易感人群。因單增李斯特氏菌污染而引起的食源性疾病暴發(fā)在全球范圍內(nèi)屢有報(bào)道,加之其較高的死亡率,為公共衛(wèi)生健康造成了巨大的危害。美國馬薩諸塞州于1983年因食用該菌污染的牛奶導(dǎo)致49人患病,14人死亡;加利福尼亞州于1985年因食用污染的奶酪造成142人發(fā)病,其中29人死亡;2002年多個(gè)州又因單增李斯特氏菌污染的火雞導(dǎo)致46人患病,7人死亡,3人流產(chǎn)。1992年因食

3、用該菌污染的豬舌頭造成法國279人患病。我國從1964～2003年因感染單增李斯特氏菌的病例為150例,死亡39例。從1988年首次報(bào)道單增李斯特氏菌對四環(huán)素產(chǎn)生耐藥以來,從不同環(huán)境、食品及臨床病例中分離出的菌株對各種抗生素的耐藥及多重耐藥現(xiàn)象愈發(fā)嚴(yán)重。隨著單增李斯特氏菌耐藥性的日益加重,臨床藥物選擇壓力也逐漸加重,這進(jìn)一步增加了疾病的死亡率。
　　單增李斯特氏菌已成為中國嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。近年來雖有不少學(xué)者開展了食品中單增李斯

4、特氏菌的研究,但多數(shù)局限于對該菌污染率的主動(dòng)性監(jiān)測。因此,本研究對山東省2003～2010年食品中單增李斯特氏菌分別運(yùn)用耐藥性試驗(yàn)、血清學(xué)分型和脈沖場凝膠電泳分型(PFGE)三種方法進(jìn)行綜合的流行病學(xué)研究,探討不同菌株之間的遺傳相關(guān)性及不同分型方法之間的聯(lián)系,為有效地控制和預(yù)防食源性疾病提供科學(xué)依據(jù)。
　　研究目的：
　　1.研究山東省不同食品中單增李斯特氏菌的耐藥性,分析山東省單增李斯特氏菌的耐藥趨勢,為抗生素耐藥的危險(xiǎn)性

5、評估和管理提供理論基礎(chǔ)。
　　2.研究不同食品中單增李斯特氏菌的血清學(xué)型別,分析優(yōu)勢血清型菌株的分布情況。
　　3.研究單增李斯特氏菌PFGE型別的分布特點(diǎn),分析不同菌株之間的遺傳相關(guān)性,建立山東省單增李斯特氏菌的數(shù)據(jù)庫,為單增李斯特氏菌的分布特點(diǎn)、菌株關(guān)聯(lián)及分子流行病學(xué)研究提供平臺。
　　4.比較耐藥性試驗(yàn)、血清學(xué)分型和脈沖場凝膠電泳分型三種方法的優(yōu)劣,并分析不同分型方法之間的關(guān)系。
　　研究方法：
　　

6、1.采用CLSI推薦的微量肉湯稀釋法進(jìn)行耐藥性試驗(yàn)。
　　2.采用玻片凝集法、試管凝集法對單增李斯特氏菌進(jìn)行血清學(xué)分型。
　　3.按照PulseNet標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行脈沖場凝膠電泳分型。
　　研究結(jié)果：
　　1.252株單增李斯特氏菌對15種抗生素的平均耐藥率為15.87%,可分為21種耐藥型別。其中,對亞胺培南的耐藥率最高(3.97%),其次為四環(huán)素和環(huán)丙沙星(均為1.59%),對慶大霉素、氨芐西林和青霉素尚未出現(xiàn)

7、耐藥菌株。多重耐藥率為4.37%。不同樣品、采樣年份和采樣地點(diǎn)中分別以生豬肉中(22.09%),2007年(38.89%),臨沂(29.41%)的菌株耐藥率最高。
　　2.252株單增李斯特氏菌分為6種血清型,以1/2c型菌株最多,出現(xiàn)了致病力最強(qiáng)的4b型菌株,且4b型菌株的耐藥率最高(22.74%)。不同樣品、采樣年份和采樣地點(diǎn)中分別以生雞肉中(優(yōu)勢血清型為1/2a型,59.15%),2005年(優(yōu)勢血清型為1/2c型,40.5

8、4%),濟(jì)南地區(qū)(優(yōu)勢血清型為1/2c型,38.71%)的菌株血清型種類最多,分別包括6種血清型。
　　3.PFGE分型將252株單增李斯特氏菌分為73個(gè)型別,同源性在50.43～100.00%之間,優(yōu)勢型別為24型(15.48%),不同食品來源、采樣年份和采樣地點(diǎn)的優(yōu)勢型別分別為33型(23.94%)、24型(22.97%)及24型(15.48%)。
　　4.三種方法的辛普森分辨指數(shù)分別為:耐藥性試驗(yàn)D=0.7048,血清

9、學(xué)分型D=0.7023,PFGE分型D=0.9371,可見PFGE分型方法具有較好的分辨能力。PFGE分型結(jié)果與血清學(xué)分型結(jié)果存在較為密切的聯(lián)系,與耐藥譜分型結(jié)果無明顯聯(lián)系。
　　結(jié)論：
　　1.山東省不同種類食品中存在單增李斯特氏菌的污染,應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)對食品衛(wèi)生的監(jiān)管力度。
　　2.首次運(yùn)用耐藥性試驗(yàn)、血清學(xué)分型和PFGE分型相結(jié)合的方法對山東省食品中單增李斯特氏菌進(jìn)行研究。不同菌株存在一定的耐藥性,但尚未出現(xiàn)對臨床一線

10、藥物耐藥的菌株。山東省單增李斯特氏菌的血清學(xué)型別分布較廣,應(yīng)加強(qiáng)對致病型菌株的監(jiān)測,尤其應(yīng)警惕4b型菌株的擴(kuò)散和新型耐藥型別的出現(xiàn)。山東省食品中單增李斯特氏菌來源于不同的克隆株,但部分菌株存在不同程度的親緣關(guān)系。PFGE型別與菌株的樣品來源不存在明顯相關(guān)性。PFGE型別與血清型別聯(lián)系密切,與耐藥譜無明顯聯(lián)系。
　　3.通過三種方法之間的比較,PFGE分型是分辨力最高的分型方法(辛普森分辨指數(shù)D=0.9371)。在進(jìn)行食源性致病菌的