RDP引導(dǎo)脂質(zhì)體入腦轉(zhuǎn)運(yùn)的研究.pdf

1、姜黃素是一種天然酚類抗氧化劑，也是常用的調(diào)料及食用色素，其主要藥理作用有抗病毒、抗炎、抗腫瘤、抗脂質(zhì)過(guò)氧化、抗動(dòng)脈粥樣硬化等。但它不溶于水，其結(jié)構(gòu)中的羥基極不穩(wěn)定，體內(nèi)吸收差、易代謝，體外易被氧化、光解，因而應(yīng)用受到限制。
　　將姜黃素用脂質(zhì)體包裹可有效避免上述缺點(diǎn)。脂質(zhì)體是一種由磷脂雙分子層構(gòu)成的具有類似細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)囊泡，生物相容性好，能夠提高生物利用度，減少毒副作用，同時(shí)還具有一定的靶向作用。脂質(zhì)體經(jīng)過(guò)PEG修飾后，其表面

2、被柔順而親水的PEG覆蓋，使脂質(zhì)體的表面形成水化層，即“隱形性”，減少了血漿蛋白與脂質(zhì)體的相互作用，可避免網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬，延長(zhǎng)在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間。大分子物質(zhì)和脂質(zhì)在腫瘤組織中存在透過(guò)性增強(qiáng)及滯留效應(yīng)，稱為EPR效應(yīng)(ehancedpermeablility and retention)，使得脂質(zhì)體在腫瘤組織聚集，被動(dòng)靶向腫瘤組織，并進(jìn)一步通過(guò)EPR效應(yīng)，對(duì)腫瘤組織實(shí)現(xiàn)“被動(dòng)靶向”。
　　在此基礎(chǔ)上，人們進(jìn)一步提出了“主動(dòng)靶向”的概

3、念，即將腫瘤細(xì)胞或者腫瘤新生血管的抗體或配體連接在脂質(zhì)體表面，使其能主動(dòng)作用于腫瘤組織，進(jìn)一步提高藥物的治療效果，降低毒副作用。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，腫瘤細(xì)胞或腫瘤血管會(huì)過(guò)度表達(dá)某些受體，如EGFR、轉(zhuǎn)鐵蛋白受體、葉酸受體等，而這些受體在正常細(xì)胞中不表達(dá)或少量表達(dá)，因此，在脂質(zhì)體的PEG鏈端連接靶向配體如葉酸、轉(zhuǎn)鐵蛋白、抗-EGFR抗體等，使得靶向配體與腫瘤細(xì)胞過(guò)度表達(dá)的受體特異性結(jié)合，通過(guò)“配體-受體”特異性識(shí)別與結(jié)合作用，促進(jìn)細(xì)胞對(duì)載體的內(nèi)吞

4、，增加藥物的抗腫瘤效果，并且可以定向地將藥物運(yùn)送到靶部位。
　　雖然如今對(duì)靶向脂質(zhì)體已開(kāi)展了較為深入的研究，但國(guó)內(nèi)外針對(duì)腦靶向脂質(zhì)體的研究少之又少。由于血-腦屏障(BBB)的存在，阻擋了基本上100％的大分子和超過(guò)98％的小分子藥物的入腦轉(zhuǎn)運(yùn)，使得普通脂質(zhì)體藥物難以發(fā)揮作用，因此使用PEG化磷脂將脂質(zhì)體與巰基化了的RDP相連，這種連接方式既能起到由于空間位阻產(chǎn)生的延長(zhǎng)體內(nèi)循環(huán)作用，又能通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合，使RDP大量分布于脂質(zhì)體表面，

5、使得普通脂質(zhì)體具有了明顯的腦靶向作用。
　　RDP(RVG-derived peptide)為狂犬病毒糖蛋白(RVG)的衍生肽。將RVG位于第189～214位及第330～357位具有嗜神經(jīng)性的肽段進(jìn)行改造即可獲到能靶向中樞神經(jīng)系統(tǒng)、無(wú)免疫原性的RVG衍生肽段(RDP)，這種衍生肽保留了RVG的嗜神經(jīng)性，具有將外源大分子化合物轉(zhuǎn)運(yùn)入腦的潛在功能。
　　本研究選取具有腦靶向作用的多肽RDP作為配體，以具有抗腫瘤的天然植物提取物姜

6、黃素為模型藥物，制備了具有腦靶向作用的長(zhǎng)循環(huán)姜黃素脂質(zhì)體，并對(duì)其粒徑分布、Zeta電位、分散度、包封率及穩(wěn)定性等理化性質(zhì)進(jìn)行了表征。結(jié)果表明RDP修飾后的姜黃素脂質(zhì)體(RDP-CUR-L)平均粒徑為(98.56±6.97)nm，包封率為（87.68±2.83）％，而普通姜黃素脂質(zhì)體(CUR-L)平均粒徑(81.20±5.13)nm，包封率為（89.12±3.71）％，且重現(xiàn)性、穩(wěn)定性良好。
　　運(yùn)用HPLC法檢測(cè)了小鼠經(jīng)尾靜脈注射

7、姜黃素混懸液(CUR)、CUR-L、RDP-CUR-L后，在0.25、0.5、1、2、6、8、12、24h各時(shí)間點(diǎn)，姜黃素在小鼠心、肝、脾、肺、腎、腦中的分布，體外釋放實(shí)驗(yàn)考察了CUR-L和RDP-CUR-L的釋藥情況。結(jié)果表明RDP-CUR-L與CUR-L和CUR相比能夠在體內(nèi)停留更長(zhǎng)的時(shí)間(大于24h)，且在各組織臟器中的分布發(fā)生了明顯的改變，表現(xiàn)出了明顯的腦靶向作用。
　　SH-SY5Y、U87和A549的MTT細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果

8、表明，RDP-CL的IC50明顯低于CUR-L。RDP-CUR-L對(duì)神經(jīng)細(xì)胞SH-SY5Y和U87的抑制作用強(qiáng)于非神經(jīng)性細(xì)胞A549，表現(xiàn)出了明顯的嗜神經(jīng)性。
　　在活體成像實(shí)驗(yàn)中可以看到，CUR-L在小鼠體內(nèi)分布主要于膀胱、腎、肝、脾等處，腦內(nèi)沒(méi)有分布。而RDP-CUR-L明顯入腦。小鼠經(jīng)解刨取臟器后的離體圖像，更清晰地表明了RDP的腦靶向作用。
　　綜上所述，在本實(shí)驗(yàn)課題中成功制得了RDP修飾后的姜黃素脂質(zhì)體，并驗(yàn)證了其