microRNA-184對(duì)TGF-β2誘導(dǎo)人晶狀體上皮細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的調(diào)控研究.pdf

1、目的：白內(nèi)障術(shù)后殘留的晶狀體上皮細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是后發(fā)性白內(nèi)障的主要病理改變，其具體的分子機(jī)制尤其是基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制尚不十分清楚。研究表明，轉(zhuǎn)化生長因子β2(transforming growth factorβ2，TGF-β2)是晶狀體上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化過程最有效的誘導(dǎo)因子，在后發(fā)性白內(nèi)障發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用。微小RNA(microRNAs)是一類

2、非編碼單鏈RNA，能在轉(zhuǎn)錄或翻譯水平調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)，從而在細(xì)胞增殖、凋亡、分化、腫瘤發(fā)生以及機(jī)體代謝等生命過程扮演了重要角色。目前，microRNAs參與EMT調(diào)控成為研究的熱點(diǎn)。本課題通過TGF-β2體外誘導(dǎo)人晶狀體上皮細(xì)胞發(fā)生EMT，采用microRNA調(diào)控技術(shù)，研究miR-184介導(dǎo)TGF-β2誘導(dǎo)人晶狀體上皮細(xì)胞EMT及其分子機(jī)制，為阻斷TGF-β2誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細(xì)胞EMT生物學(xué)過程及后發(fā)性白內(nèi)障的預(yù)防和治療提供了新的思路

3、。
　　方法：體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞HLE-B3，使用不同濃度TGF-β2處理細(xì)胞后，采用細(xì)胞免疫熒光及western blotting法觀察和分析晶狀體上皮細(xì)胞中上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-鈣粘連蛋白（E-cadherin）和間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物波形蛋白(vimentin)等細(xì)胞轉(zhuǎn)分化相關(guān)蛋白的變化，應(yīng)用qRT-PCR法檢測(cè)TGF-β2對(duì)細(xì)胞miR-184的表達(dá)影響。建立人晶狀體上皮細(xì)胞EMT研究模型，采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的miRNA調(diào)控技術(shù)轉(zhuǎn)染H

4、LE-B3細(xì)胞，通過qRT-PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)染miR-184mimic和miR-184 inhibitor后細(xì)胞miR-184的表達(dá)。應(yīng)用激光共聚焦及western blotting等方法觀察上調(diào)和下調(diào)miR-184基因?qū)GF-β2誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化及靶基因bin3表達(dá)影響。
　　結(jié)果：外源性TGF-β2成功誘導(dǎo)體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化。miRNA調(diào)控技術(shù)能夠在基因水平調(diào)控TGF-β2誘導(dǎo)的