IFN-α2a-NGR的腫瘤細胞敏感性研究.pdf

1、干擾素-α2a（IFN-α2a）是一種具有抗病毒、抗細胞增殖和調(diào)節(jié)免疫應答作用的細胞因子，已用于病毒性疾病和腫瘤等的治療。然而，臨床應用發(fā)現(xiàn)，體內(nèi)有多種腫瘤對IFN-α2a治療并不敏感，治療所需劑量大，可導致明顯毒副作用，限制其在臨床的廣泛應用。前期研究中，為了進一步提高IFN-α2a的抗腫瘤活性，增加其抗實體瘤的可能性，同時降低毒副作用，減少用藥量，我校生物技術(shù)中心應用生物工程技術(shù)將能與腫瘤新生血管內(nèi)皮細胞CD13（又稱氨肽酶N,am

2、inopeptidaseN,APN）特異結(jié)合的多肽NGR肽融合在IFN-α2a的羧基端，在大腸桿菌中表達了融合蛋白IFN-α2a-NGR。體內(nèi)動物實驗顯示荷瘤小鼠尾靜脈注射IFN-α2a-NGR后，藥物在腫瘤組織的血管及周圍組織明顯富集，由此造成抑瘤作用亦明顯強于IFN-α2a，達到相同療效時融合蛋白的用藥量約為普通干擾素的1/3；急性和長期毒性實驗均表明融合蛋白不引發(fā)明顯的毒副作用，安全性與普通干擾素一致。
　　但在前期研究中我

3、們?nèi)匀话l(fā)現(xiàn)并非所有腫瘤細胞均對IFN-α2a-NGR敏感，并發(fā)現(xiàn)細胞表面干擾素受體（interferonreceptor，IFNAR）表達水平的高低與該細胞對干擾素應答的敏感性相關(guān)。為了進一步探索導向干擾素IFN-α2a-NGR抗腫瘤的作用及分子機制，闡明影響腫瘤細胞對IFN-α2a-NGR應答的關(guān)鍵信號分子，尋求逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞株對IFN-α2a-NGR的敏感性的方法，我們在前期實驗的基礎上，以干擾素受體高表達的人肺腺癌A549細胞和IF

4、NAR低表達的人胃癌MKN-45細胞為模型，在細胞水平分析了導向性干擾素IFN-α2a-NGR的抗腫瘤效應，為其進一步的研發(fā)奠定基礎。
　　在本課題中我們通過培養(yǎng)細胞株A549和MKN-45，應用MTT檢測、流式細胞術(shù)（FCM）、Westernblot以及合成siRNA靶向干涉通路中的信號分子，證實了導向干擾素IFN-α2a-NGR與普通干擾素IFN-α2a在細胞和分子水平的效應基本一致，即主要通過JAK/STAT信號途徑的激活發(fā)

5、揮抑制細胞增殖的功能。但在干擾素IFN-α2a-NGR刺激后，細胞株A549和MKN-45胞內(nèi)分子表達變化存在明顯差異，A549細胞中，p-STAT1、p53、OAS與SOCS1表達上調(diào)；MKN-45中p53、OAS無顯著變化，SOCS1顯著上調(diào)。通過靶向干涉SOCS1，可提高MKN-45細胞對IFN-α2a-NGR的敏感性。
　　本研究部分揭示了IFN-α2a-NGR抑制腫瘤細胞增殖的分子機制，并初步證實p-STAT1、p53與