人卵巢癌腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞的分離、鑒定及對(duì)化療藥物敏感性的研究.pdf

1、卵巢癌是致死率最高的婦科惡性腫瘤。高復(fù)發(fā)率和復(fù)發(fā)后的高耐藥率是其高死亡率最主要的原因之一。近年來提出的腫瘤干細(xì)胞(Cancer stem cells，CSCs)學(xué)說認(rèn)為腫瘤組織由異質(zhì)性的細(xì)胞群體構(gòu)成；腫瘤組織中存在極少量具有干細(xì)胞性質(zhì)的癌細(xì)胞亞群，具有多向分化潛能和無限的增殖及自我更新能力，是腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、及耐藥的決定性因素。CSCs目前已在血液系統(tǒng)腫瘤及乳腺癌、腦腫瘤等實(shí)體瘤中相繼分離。卵巢癌CSCs的研究相對(duì)較遲

2、，其表型還不明確，存在較多爭(zhēng)議，耐藥等特點(diǎn)的研究尚有待完善。
　　 本研究首先以人上皮性卵巢癌細(xì)胞系3AO為模型，進(jìn)行卵巢癌腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞（Cancer stem cell-like cells，CSC-LCs)的分離、鑒定，明確其細(xì)胞標(biāo)志物；并觀察不同濃度下CSC-LCs對(duì)化療藥物敏感性的變化。在此研究基礎(chǔ)上，對(duì)卵巢癌原代標(biāo)本CSC-LCs進(jìn)行了初步研究。旨在從CSCs視角，闡明卵巢癌發(fā)生和耐藥機(jī)制，為探索卵巢癌診治新靶點(diǎn)提

3、供實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
　　 第一部分：3AO細(xì)胞系中卵巢癌CSC-LCs的分離和鑒定
　　 目的：
　　 從人上皮性卵巢細(xì)胞系3AO中分離鑒定CSC-LCs，明確其細(xì)胞標(biāo)記物，并對(duì)其進(jìn)行藥物敏感性研究。
　　 方法：
　　 無血清懸浮培養(yǎng)法形成3AO腫瘤細(xì)胞球體，流式檢測(cè)明確其表型，并使用該表型進(jìn)行流式分選，將收獲的細(xì)胞進(jìn)行異種移植成瘤、干細(xì)胞標(biāo)志物檢測(cè)及分化等鑒定實(shí)驗(yàn)，并觀察不同濃度下CSC-LCs對(duì)泰

4、素和卡鉑敏感性的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.3AO細(xì)胞亞群可形成能自我更新的懸浮球體；
　　 2.3AO球體細(xì)胞富集CD44?CD24?表型細(xì)胞；
　　 3.3AO球體細(xì)胞及CD44?CD24?細(xì)胞具有高度致瘤性；
　　 4.CD44?CD24?細(xì)胞可分化為CD44?CD24?細(xì)胞；
　　 5.CD44?CD24?細(xì)胞對(duì)泰素和卡鉑高度耐藥。
　　 結(jié)論：
　　 1.CD

5、44?CD24?卵巢癌細(xì)胞具有CSC-LCs新的表型特征、自我更新能力及高致瘤能力，且可分化為CD44?CD24?卵巢癌細(xì)胞，證實(shí)其為卵巢癌CSC-LCs。
　　 2.CD44?CD24?卵巢癌細(xì)胞對(duì)化療藥物具有顯著耐藥性，卵巢癌的治療應(yīng)該靶向CD44?CD24?卵巢癌細(xì)胞。
　　 第二部分：卵巢癌組織和腹水細(xì)胞原代標(biāo)本中CSC-LCs的初步研究
　　 目的：
　　 證實(shí)卵巢癌標(biāo)本原代培養(yǎng)細(xì)胞中卵巢癌CS

6、C-LCs的存在。
　　 方法：
　　 取新鮮晚期卵巢上皮性癌組織和腹水，經(jīng)切割、消化、分離等處理后，將獲得的單細(xì)胞懸液在無血清條件下懸浮培養(yǎng)形成腫瘤細(xì)胞球體。收集該原代卵巢癌球體細(xì)胞，流式檢測(cè)明確其表型特點(diǎn)并觀察體外分化情況，免疫熒光驗(yàn)證干細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)。將卵巢癌球體細(xì)胞與其分化細(xì)胞比較，觀察其對(duì)泰素或卡鉑的藥物敏感性差異.
　　 結(jié)果：
　　 1.卵巢癌組織和腹水細(xì)胞體外可形成球體細(xì)胞；
　　

7、 2.原代卵巢癌球體細(xì)胞中富集CD44?CD24?表型；
　　 3.原代卵巢癌球體細(xì)胞表達(dá)干細(xì)胞標(biāo)志物；
　　 4.原代卵巢癌CD44?CD24?球體細(xì)胞可出現(xiàn)分化；
　　 5.原代卵巢癌CD44?CD24?球體細(xì)胞對(duì)泰素和卡鉑高度耐藥。
　　 結(jié)論：
　　 上皮性卵巢癌原代細(xì)胞經(jīng)球體細(xì)胞培養(yǎng)，富集CD44?CD24?表型，并表達(dá)干細(xì)胞表型，具有分化能力及顯著的化療藥物耐藥性，提示來自原代的CD4