梅山豬斷奶仔豬腹瀉模型的建立及抗性基因的表達(dá)分析.pdf

1、腹瀉是導(dǎo)致斷奶仔豬死亡的主要疾病，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大經(jīng)濟(jì)損失。E.coli F18菌株是引起斷奶仔豬腹瀉的主要病原菌。目前中國地方品種斷奶仔豬抗E.coli F18的遺傳基礎(chǔ)和調(diào)控機(jī)制尚不清楚，而且國內(nèi)地方品種對E.coli F18的抗性基因和遺傳機(jī)制可能有別于外來引進(jìn)品種?；蛐酒案咄繙y序等技術(shù)為E.coli F18抗性候選基因的篩選提供了有力手段，但其前提需要獲得斷奶仔豬E.coliF18抗性型和敏感型全同胞個體，因此地方豬品種

2、極端表型個體有效的篩選和鑒定已成為其抗性遺傳基礎(chǔ)研究的關(guān)鍵和瓶頸。此外，研究報道針對仔豬細(xì)菌性腹瀉，目前人為的細(xì)菌攻毒試驗是獲取素材的較好途徑。本研究以中國地方品種—梅山豬斷奶仔豬為研究對象，采用E.coli F18ac菌株攻毒試驗，并利用腸道細(xì)菌檢測、細(xì)菌計數(shù)以及小腸上皮細(xì)胞黏附試驗等方法進(jìn)行驗證，以期獲得E.coli F18抗性型和敏感型個體，為今后研究梅山豬抗E.coli F18遺傳機(jī)理提供寶貴素材，同時也為中國地方豬品種細(xì)菌性疾

3、病模型的建立提供指導(dǎo)和參考。其次，結(jié)合課題組前期在蘇太豬上的研究進(jìn)展，對鞘糖脂生物合成—球系列通路及炎癥免疫通路相關(guān)基因在梅山豬攻毒群體中的表達(dá)水平進(jìn)行初步探究，旨在分析梅山豬E.coli F18腹瀉抗性的調(diào)控通路及關(guān)鍵基因，最終為國內(nèi)地方豬品種E.coli F18腹瀉的抗病育種提供一定的科學(xué)依據(jù)。主要試驗結(jié)果如下:
　　1、梅山仔豬攻毒后出現(xiàn)腹瀉、輕度腹瀉和不腹瀉3種不同表型。腹瀉仔豬腸道內(nèi)容物中的E.coli F18數(shù)量遠(yuǎn)多于

4、正常仔豬;黏附試驗發(fā)現(xiàn)腹瀉仔豬小腸上皮細(xì)胞大量黏附E.coli F18，而正常仔豬小腸上皮細(xì)胞與E.coli F18基本不黏附;病理組織切片結(jié)果表明，重度腹瀉仔豬病變腸道組織間隙充血，黏膜層絨毛脫落、長度縮短，由此可以推測E.coli F18與仔豬小腸上皮細(xì)胞受體結(jié)合后破壞了黏膜層絨毛的完整性，從而定居繁殖造成仔豬腹瀉。綜合上述結(jié)果，本試驗仔豬腹瀉確實由攻毒造成，獲得了E.coli F18抗性型和敏感型仔豬全同胞個體，即成功建立梅山豬斷

5、奶仔豬腹瀉模型，為今后豬細(xì)菌性腹瀉遺傳基礎(chǔ)研究素材和抗病育種基礎(chǔ)群的獲得提供了切實有效的方法和途徑。
　　2、試驗采用RT-PCR技術(shù)對鞘糖脂生物合成—球系列及炎癥免疫通路相關(guān)基因在梅山豬E.coli F18抗性型和敏感型個體間的表達(dá)水平進(jìn)行探究。結(jié)果表明，鞘糖脂生物合成—球系列通路相關(guān)基因在抗性和敏感個體間的組織表達(dá)水平均沒有顯著差異（P＞0.05）;E.coli F18抗性組仔豬脾臟中的IL-1β、TNF-α基因表達(dá)量顯著高于

6、敏感組（P＜0.05），抗性組淋巴結(jié)中的TNF-α基因表達(dá)量顯著高于敏感組(P＜0.05)，抗性組胸腺中的SLA-3基因表達(dá)量也顯著高于敏感組(P＜0.05)，此外BPI基因在抗性仔豬十二指腸中的表達(dá)量極顯著高于敏感個體(P＜0.01)。以上結(jié)果進(jìn)一步表明中國地方豬品種與外來品種抗E.coli F18的遺傳基礎(chǔ)和調(diào)控機(jī)制確實存在差異，在外來品種中發(fā)揮重要調(diào)控作用的鞘糖脂生物合成—球系列通路并未在梅山斷奶仔豬抗E.coli F18感染的過