表達(dá)PRRSV GP5蛋白的重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其免疫效力的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究將CMV啟動子控制下的豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)CH1a株GP5基因和SV40啟動子控制下的LacZ基因表達(dá)盒插入到偽狂犬病病毒(pseudorabiesvirus，PRV)通用轉(zhuǎn)移載體pBdTK-Uni中，構(gòu)建了含目的基因和報告基因的轉(zhuǎn)移載體pGP5-LacZ，將pGP5-LacZ與呈gE-表型的偽狂犬病弱毒疫苗Bartha-K61株基因組DNA，通過脂質(zhì)體法共轉(zhuǎn)染Vero細(xì)胞，經(jīng)過10代藍(lán)斑篩選、蝕斑純化和PCR鑒定

2、獲得了一株穩(wěn)定表達(dá)PRRSVGP5的重組偽狂犬病病毒，命名為rPRV-GP5。經(jīng)生長動力學(xué)、表達(dá)動力學(xué)和間接免疫熒光試驗(yàn)證實(shí)，rPRV-GP5感染細(xì)胞15小時GP5蛋白即可被Westernblot方法在感染的細(xì)胞中檢測到，而在釋放到上清中的病毒粒子上未檢測到GP5，rPRV-GP5感染細(xì)胞可以用PRRSV特異抗體檢測到胞漿熒光，證實(shí)表達(dá)的蛋白主要分泌到感染細(xì)胞的胞漿中或細(xì)胞膜上而不存在于病毒粒子表面，且表達(dá)蛋白的抗原性與親本病毒相似。r

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