水痘-帶狀皰疹病毒糖蛋白E DNA疫苗的免疫原性研究.pdf

1、水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)為DNA雙鏈病毒，長(zhǎng)度約為125000個(gè)堿基對(duì)?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)VZV基因組有69個(gè)開放讀碼框(ORFs)，至少可以編碼6種糖蛋白，相對(duì)分子量從20×103到118×103，分別為gE、gB、gH、gI、gC和gL。其中糖蛋白E(gE)是第68個(gè)開放讀碼框的編碼產(chǎn)物，初期翻譯產(chǎn)物的相對(duì)分子量為73×103，成熟的糖基化產(chǎn)物為88×103～98×103。糖蛋白E是病毒感染細(xì)胞表面最豐富的糖蛋白，能夠誘導(dǎo)中和抗體和T輔助

2、細(xì)胞反應(yīng)，并且含有被CD4+和CD8+細(xì)胞識(shí)別的抗原決定簇。 水痘-帶狀皰疹病毒可引起水痘與帶狀皰疹兩種常見疾病，主要感染新生兒、成人和免疫缺陷的患者，后遺神經(jīng)痛是常見的并發(fā)癥。VZV減毒活疫苗(Oka株)已在世界范圍內(nèi)廣泛應(yīng)用多年。雖然該疫苗可以有效的預(yù)防嚴(yán)重的水痘，但是該疫苗仍存在潛伏性和體內(nèi)復(fù)活等問題，所以國(guó)外已有學(xué)者開展了關(guān)于VZV新型疫苗的研究。其中所采用的DNA免疫技術(shù)在試驗(yàn)階段已經(jīng)能夠預(yù)防病毒、細(xì)菌和寄生蟲感染，比

3、傳統(tǒng)的以蛋白為基礎(chǔ)的疫苗預(yù)防有更大的優(yōu)勢(shì)。 本研究選擇水痘-帶狀皰疹病毒DNA疫苗這一研究領(lǐng)域，構(gòu)建了水痘-帶狀皰疹病毒糖蛋白EDNA疫苗，并用核酸免疫技術(shù)評(píng)價(jià)其免疫原性。 首先用PCR方法擴(kuò)增出水痘-帶狀皰疹病毒糖蛋白E的基因片段，構(gòu)建其原核融合表達(dá)質(zhì)粒pGEX-VZVgE，并將表達(dá)產(chǎn)物純化鑒定。然后構(gòu)建其真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA-VZVgE，在體外轉(zhuǎn)染COS7細(xì)胞獲得有效表達(dá)的基礎(chǔ)上，將其免疫BALB/c小鼠后，檢測(cè)小

4、鼠體內(nèi)所產(chǎn)生的抗原特異性抗體水平，以及免疫小鼠脾淋巴細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)后的T細(xì)胞數(shù)量、增殖活性和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)的殺傷活性。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)pcDNA-VZVgEDNA疫苗免疫小鼠后所產(chǎn)生的抗原特異性抗體水平，免疫小鼠的脾淋巴細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)后的T細(xì)胞數(shù)量、增殖活性和CTL應(yīng)答均明顯強(qiáng)于未接種VZVgE基因DNA疫苗的小鼠，從而為研究水痘-帶狀皰疹病毒DNA疫苗開辟了一條嶄新的途徑。今后將作進(jìn)一步的深入研究，以期最終研制出能