糖尿病視網(wǎng)膜病變免疫學(xué)機(jī)制的研究.pdf

1、目的：檢測(cè)血清IgG型抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)，并探討其在不同分型糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)間的變化趨勢(shì)。同時(shí)，觀察中藥黃芪對(duì)于DR患者血清IgG型AECA刺激引起的體外培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞(EC)分泌腫瘤壞死因子-a(TNF-a)的影響。 方法：本研究共分兩部分內(nèi)容。 1將研究對(duì)象分為四組：根據(jù)熒光素眼底血管造影(FFA)及檢眼鏡檢查分為糖尿病無(wú)糖尿病視網(wǎng)膜病變(DM-NDR)組、背景型糖尿病視網(wǎng)膜病變(BDR)組及增殖型糖尿

2、病視網(wǎng)膜病變(PDR)組，并設(shè)立正常對(duì)照組。用體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)作為抗原，采用間接免疫熒光(IIF)法檢測(cè)患者血清IgG型AECA陽(yáng)性率的變化，并與正常對(duì)照組進(jìn)行對(duì)比。采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)各組陽(yáng)性率數(shù)據(jù)進(jìn)行R×C表x2檢驗(yàn)，組間陽(yáng)性率比較采用x2分割。分析DM病程與IgG型AECA陽(yáng)性數(shù)間的關(guān)聯(lián)采用雙變量相關(guān)分析。不同DM病程IgG型AECA陽(yáng)性率比較采用R×C表x2檢驗(yàn)。 2離子交換層析法純化D

3、R患者血清IgG型AECA，刺激體外培養(yǎng)HUVEC，并同時(shí)加入中藥黃芪注射液。建立了四甲基偶氮唑鹽(MTT)法測(cè)定AECA刺激HUVEC后產(chǎn)生的TNF-a對(duì)WEHI164.13細(xì)胞的殺傷情況，并觀察中藥黃芪對(duì)TNF-a殺傷作用所產(chǎn)生的影響。對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，組間兩兩比較采用多重比較法(LSD法)。 結(jié)果： 1經(jīng)R×C表x2檢驗(yàn)各組間陽(yáng)性率有顯著性差異(x2=97.892，P＜0.01)。經(jīng)x2分割，對(duì)照組與DM-ND

4、R組間無(wú)顯著性差異(x2=0.000，P＞0.05)，將上述2組合并為非視網(wǎng)膜病變組；BDR組與PDR組間無(wú)顯著性差異(x2=0.346，P＞0.05)，將2組合并為DR組。DR組陽(yáng)性率(82.50％)高于非視網(wǎng)膜病變組(5.00％)，二者有顯著性差異(x2=97.625，P＜0.01)。經(jīng)雙變量相關(guān)分析，DM病程與IgG型AECA陽(yáng)性數(shù)間存在正相關(guān)關(guān)系(r=0.908，P＜0.01)。經(jīng)R×C表x2檢驗(yàn)，不同DM病程組IgG型AECA

5、陽(yáng)性率比較有顯著性差異(x2=15.186，P＜0.01)。 2隨著IgG型AECA濃度升高，TNF-a生成量增加，各濃度間有顯著性差異(F=5.093，P＜0.05)。不同濃度抗體條件下三個(gè)藥物濃度間比較均有顯著性差異，其中濃度2.5％時(shí)(F=80.451，P＜0.05)，濃度5％時(shí)(F=30.341，P＜0.05)，濃度10％時(shí)(F=114.465，P＜0.05)，又以不加藥物時(shí)殺傷活性最高，其次為低濃度藥物，最低為高濃度藥

6、物。不同藥物濃度條件下三個(gè)抗體濃度間比較有顯著性差異，其中高濃度藥物時(shí)(F=30.723，P＜0.05)，低濃度藥物時(shí)(F=5.187，P＜0.05)，不加藥物時(shí)(F=5.093，P＜0.05)，又以抗體濃度10％時(shí)殺傷活性最高，依次為5％、2.5％，不加抗體時(shí)無(wú)明顯殺傷活性。 結(jié)論： 1IIF法檢測(cè)血清IgG型AECA快速、特異、經(jīng)濟(jì)、定位準(zhǔn)確，且具有較好的可重復(fù)性，可同時(shí)檢測(cè)大量抗體，獲得較高的檢測(cè)效率。 2DR組I

7、gG型AECA陽(yáng)性率明顯高于非視網(wǎng)膜病變組。DM病程與IgG型AECA陽(yáng)性數(shù)間的關(guān)聯(lián)以及不同DM病程IgG型AECA陽(yáng)性率比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這些結(jié)果表明IgG型AECA與DR發(fā)病存在著聯(lián)系，隨著由正常眼底到DR的轉(zhuǎn)變，血清IgG型AECA陽(yáng)性率呈增高趨勢(shì)。而B(niǎo)DR與PDR組間抗體陽(yáng)性率無(wú)顯著性差異，表明血清IgG型AECA陽(yáng)性的患者有可能從BDR發(fā)展為PDR，這在不同DM病程組IgG型AECA陽(yáng)性率比較的結(jié)果中也得到了證實(shí)。

8、3通過(guò)MTT比色法，可以利用對(duì)TNF-a高度敏感的WEHI164.13細(xì)胞來(lái)測(cè)定TNF-a的殺傷活性。IgG型AECA可以刺激EC分泌TNF-a，通過(guò)對(duì)TNF-a殺傷活性的檢測(cè)能夠評(píng)價(jià)IgG型AECA對(duì)EC的損傷作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：TNF-a對(duì)WEHI164.13細(xì)胞產(chǎn)生了顯著的殺傷作用，且呈現(xiàn)明顯的濃度依賴性。可以認(rèn)為：隨著IgG型AECA濃度的增加，其刺激EC后分泌的TNF-a殺傷活性增高，這就明確了IgG型AECA對(duì)EC的損傷作用