體外SELEX法篩選淋病奈瑟菌適體方法的建立.pdf

1、淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae)是我國性傳播疾病中發(fā)病率最高的疾病淋病的致病菌。病變威害人類健康，增加了感染HTV的危險，對我國公共衛(wèi)生已構(gòu)成十分嚴(yán)重的威脅。 SELEX技術(shù)即配體指數(shù)富集的系統(tǒng)進化技術(shù)(Systematic Evolut ion of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX)，是一種新型的體外篩選技術(shù)。適體(aptamer)，又稱適配分子或適配子，

2、其實質(zhì)是運用SELEx技術(shù)從人工體外合成的隨機寡核苷酸序列庫中反復(fù)篩選得到的能以極高的親和力和特異性與靶分子結(jié)合的一段寡核苷酸序列。 適體的功能類似于抗體但明顯優(yōu)于抗體，具有靶分子范圍廣泛、親和力和特異性高、制備方便、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，在臨床治療和診斷方法等方面都具有廣闊的應(yīng)用前景。本研究旨在運用SELEx技術(shù)從人工體外合成的隨機ssDNA文庫中篩選到針對淋病奈瑟球菌的特異性適體，為建立快速而簡便檢測淋病奈瑟菌的實驗室方法奠定基礎(chǔ)

3、。 在所進行的研究中，首先在體外合成一個全長78個核苷酸中間含35個隨機序列的隨機核苷酸文庫，取一定量ssDNA于binding buffer中95℃加熱5分鐘，迅速4℃冷卻10分鐘，再投入適量的淋病奈瑟菌，室溫?fù)u勻30分鐘后離心分離，使用洗脫液懸起沖洗，反復(fù)4次，盡量洗去結(jié)合不強的片段。最后菌體和目的片段的復(fù)合體在99℃的蒸餾水加熱3分鐘后中釋放出所篩選的目的片段，使用試劑盒純化這些運用SELEX技術(shù)篩選到的寡核苷酸分子，以之