菌影疫苗和淋病奈瑟菌疫苗的制備及其免疫原性初步研究.pdf

1、菌影疫苗和淋病奈瑟菌疫苗的制備及其免疫原性初步研究P r e p a r a t i o no f b a c t e r i a lg h o s t s a n d N e i s s e r i a g o n o r r h o e a e v a c c i n e a n dp r i m i n g s t u d yo n t h e i ri m m u n o g e n i c i t y碩士研究生： 賀麗導(dǎo) I

2、J i 而． 焦紅梅副教授揚(yáng)州大學(xué)2 0 1 3 年5 月?lián)P州大學(xué)碩士學(xué)位論文以溶菌質(zhì)粒為模板，P C R 擴(kuò)增溫控溶菌盒( E B O X l ／E B O X 2 ) ，用限制性內(nèi)切酶( X h oI 、S p eI ) 酶切后重組到p B B R l M C S 2 載體相應(yīng)的酶切位點(diǎn)中。通過電轉(zhuǎn)化法將構(gòu)建的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入沙門氏菌H A 2 中，獲得的重組菌經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)，p B B R l M C S 2 ．E B O X 2 裂解效

3、率達(dá)到9 8 ．6 7 ％。掃描電鏡和透射電鏡結(jié)果顯示，腸炎沙門氏菌內(nèi)容物流失形成菌影。將6 ～8 周齡的B A L B ／c 小鼠，隨機(jī)分成3 組：沙門氏菌H A 2 菌影組( H A 2 ．B G 組) 、沙門氏菌H A 2 滅活菌組、P B S 對(duì)照組。H A 2 ．B G 組和P B S 組通過口服和滴鼻免疫，H A 2滅活菌組以肌肉注射的方式免疫，每?jī)芍苊庖咭淮危裁庖? 次。間接E L I S A 檢測(cè)血清中I g G 和糞

4、便中I g A 水平。結(jié)果表明，二免兩周后，H A 2 一B G 組和H A 2 滅活菌組血清中I g G含量顯著高于P B S 組( P < O ．0 5 ) ，三免兩周后，達(dá)到極顯著( P < O ．0 1 ) ；H A 2 ．B G 組糞便中I g A 含量在整個(gè)免疫期間均顯著高于H A 2 滅活菌組和P B S 組。說明沙門氏菌菌影具有良好的免疫原性，可激發(fā)小鼠產(chǎn)生特異性體液免疫應(yīng)答和局部的黏膜免疫應(yīng)答。三、減毒沙門

5、氏菌介導(dǎo)淋病奈瑟菌D N A 疫苗的構(gòu)建及其免疫原性初步研究以淋病奈瑟菌W H O ．A 株基因組D N A 為模板分別擴(kuò)增N s p A 基因和P o r B 基因，將克隆的N s p A 基因和P o r B 基因分別與p V A X l 載體連接，成功構(gòu)建了重組真核表達(dá)質(zhì)粒p V A X l ．N s p A 和p V A X l ．P o r B 。將重組質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)染小鼠巨噬細(xì)胞R A W 2 6 4 ．7 ，R T - P C

6、 R 和間接免疫熒光試驗(yàn)可檢測(cè)出N s p A 基因和P o r B 基因在m R N A 水平和蛋白水平表達(dá)。將重組真核表達(dá)質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化減毒沙門氏菌S L 7 2 0 7 ，構(gòu)建出重組沙門氏菌S L 7 2 0 7 ( p V A X l - N s p A )和S L 7 2 0 7 ( p V A X l ．P o r B ) 。將6 ～8 周齡的B A L B ／c 小鼠隨機(jī)分為五組：S L 7 2 0 7( p V A X l

7、一N s p A ) 組、S L 7 2 0 7 ( p V A X l - P o r B ) 組、S L 7 2 0 7 ( p V A X l - N s p A ) + S L 7 2 0 7( p V A X l ．P o r B ) 組、S L 7 2 0 7 ( p V A X l ) 組和P B S 組，每組滴鼻1 5 1 服免疫1 ×1 0 9 C F U ，間接E L I S A 檢測(cè)抗體。結(jié)果顯示，各重組

8、菌S L 7 2 0 7 ( p V A X l ．N s p A ) 組、S L 7 2 0 7 ( p V A X l ．P o r B )組、S L 7 2 0 7 ( p V A X l - N s p A ) + S L 7 2 0 7 ( p V A X l ．P o r B ) 組在一免兩周后就能檢測(cè)到血清中I g G 和糞便中I g A 抗體，二免和三免后，其抗體水平均顯著高于S L 7 2 0 7 ( p V A X