重癥肌無力幼鼠經(jīng)鼻粘膜耐受的免疫學(xué)機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分實驗性自身免疫性重癥肌無力(EAMG)動物模型的建立。 目的:利用乙酰膽堿受體(AChR)單克隆抗體mAb35,采用預(yù)實驗成功建立MG動物模型的最佳劑量(1.0mg/Kg),腹腔注射(ip)給C57BL6(B6)幼年小鼠,建立實驗性自身免疫性重癥肌無力(EAMG)動物模型,并鑒定模型建立是否成功。為進一步研究MG的發(fā)病機理及其相應(yīng)的免疫治療方法提供實驗動物模型。 方法:將實驗組分為2組(模型組M和正常對照組C),

2、模型組(M)C57BL/6幼年小鼠經(jīng)腹腔注射含mAb35 1.0mg/kg的Ringer's液0.2ml,對照組(C)小鼠經(jīng)腹腔注射不含mAb35的Ringer's液0.2ml。對小鼠進行臨床表現(xiàn)的觀察,低頻重復(fù)電刺激檢查(RNS),EIJSA法檢測血清中的AChR-Ab水平,以判斷模型建立是否成功。 結(jié)果:經(jīng)腹腔注射含mAb35的Ringer’s液12~24h后,大部分模型組小鼠出現(xiàn)體重減輕、活動減少、肌力降低等MG臨床癥狀,

3、而正常對照組小鼠活動、攝食如常,無1例出現(xiàn)臨床癥狀。模型組小鼠表現(xiàn)肌無力和易疲勞的臨床表現(xiàn),同時伴有肌電圖衰減、新斯的明試驗陽性、血清學(xué)中AChR-Ab升高的實驗室檢查結(jié)果,所有這些均與MG患者的臨床表現(xiàn)和實驗室檢查結(jié)果相似,也符合MG的病理生理特點。結(jié)論:C57BL/6小鼠為建立EAMG動物模型的敏感品系。利用AChR單克隆抗體mAb35可在幼年C57BL/6小鼠成功建立EAMG模型,其有效劑量為1.0mg/kg,該方法簡便、可靠,為

4、研究兒童MG提供了一種很好的實驗動物模型。 第二部分重癥肌無力幼鼠經(jīng)鼻粘膜耐受的免疫學(xué)機制研究。 目的:采用特異性耐受原一雙類似物(Lys262-Ala207),在不同時間點對實驗性自身免疫性重癥肌無力(EAMG)幼鼠進行鼻粘膜給藥,觀察臨床表現(xiàn)、免疫學(xué)指標的改變情況,評價其臨床療效、探討鼻粘膜耐受對EAMG的預(yù)防效果及作用機制,以期為兒童MG的治療提供一種理論依據(jù),為臨床探索MG的防治方法開辟一條新的途徑。 方

5、法:應(yīng)用單克隆抗體mAb35腹腔注射致敏C57BL/6(B6)幼年小鼠建立EAMG模型,選取雙類似物L(fēng)ys262-Ala207作為耐受原在致敏前10d(預(yù)防耐受組A)及致敏當日(預(yù)防耐受組B)給予含有25μg耐受肽的PBS 50μL鼻腔給藥,每個鼻孔25μL,連續(xù)10d。而相應(yīng)對照組CA、CB按照相同時間程序,鼻飼含有等量不含耐受肽的PBS50μL,每個鼻孔25μL。檢測實驗各組小鼠體重、觀察臨床評分、低頻重復(fù)電刺激檢查(RNS),檢測

6、血清抗AChR-Ab水平以及IL-lO、IL-4和IFN-γ分泌細胞含量變化和小鼠脾臟單個核細胞(MNC)中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞的變化情況。 結(jié)果: (1)A、B兩組小鼠未出現(xiàn)體重下降而臨床癥狀明顯輕于相應(yīng)對照組,且A組臨床癥狀輕于B組。 (2)神經(jīng)電生理檢查:A、B兩組低頻重復(fù)電刺激(RNS)出現(xiàn)衰減反應(yīng)D5陽性率低于各自對照組。 (3)A、B兩組小鼠血清中乙酰膽堿受體抗體AChR-Ab的水平

7、明顯低于各自對照組,且A組輕于B組。 (4)A、B組實驗小鼠血清中IL-4、IFN-γ、IL-10分泌細胞含量均低于各自對照組,且A組低于B組。 (5)實驗小鼠脾臟MNC中調(diào)節(jié)性CD4+CD25+Tr細胞含量A組明顯高于B組,且A、B組明顯高于各自對照組。 結(jié)論: 1.雙類似物(Lys262-Ala207)經(jīng)鼻粘膜耐受對預(yù)防實驗幼鼠發(fā)生EAMG具有較好的效果,除臨床癥狀較輕外,且伴有特異性T細胞、B細胞免

8、疫功能的抑制,即:血清AChR-Ab含量明顯減少,外周血中IL-4、IFN-γ、IL-10分泌降低,CD4+CD25+Tr細胞含量明顯增加。 2.雙類似物(Lys262-Ala207)經(jīng)鼻粘膜耐受可下調(diào)針對AChR自身免疫反應(yīng)的作用,不同的時間點預(yù)防耐受效果不同,致敏前優(yōu)于致敏時耐受,提示自身免疫反應(yīng)一旦啟動再給予耐受的療效要遜于自身免疫反應(yīng)啟動前耐受治療。 3.本研究證實雙類似物經(jīng)鼻粘膜耐受治療EAMG有效、給藥途徑方

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