維生素E抗紫外線誘導(dǎo)的北京油雞成纖維細(xì)胞凋亡作用的研究.pdf

1、本文以北京油雞胚胎為材料，采用組織塊貼壁培養(yǎng)法進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，系統(tǒng)闡述了在紫外線照射誘導(dǎo)的北京油雞成纖維細(xì)胞的凋亡過程中維生素E對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。應(yīng)用MTT法進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測(cè)，AnnexinV-EGFP/PI檢測(cè)磷脂酰絲氨酸結(jié)合力的強(qiáng)弱，Rh-123檢測(cè)線粒體膜電位的變化，F(xiàn)CM檢測(cè)細(xì)胞周期的變化，RT-PCR檢測(cè)紫外線及維生素E作用前后bcl-2、bax、fas、caspase-3基因mRNA表達(dá)水平的變化。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1

2、.紫外線對(duì)成纖維細(xì)胞有明顯的促凋亡作用，而且具有作用時(shí)間依賴性，照射時(shí)間越長(zhǎng)，凋亡效果越明顯，當(dāng)照射達(dá)32min后，細(xì)胞生長(zhǎng)基本受到全面抑制。維生素E能明顯抑制細(xì)胞的凋亡，濃度越大抑制效果越明顯。但是，當(dāng)達(dá)到50μmol/L后，用藥組的細(xì)胞活性反而低于非用藥組，表明維生素E對(duì)細(xì)胞凋亡的抑制也是在一定限度內(nèi)發(fā)揮作用，超過限度，細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制。 2.本實(shí)驗(yàn)通過流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)，表明維生素E有較強(qiáng)的抑制凋亡作用。維生素E作用經(jīng)紫外

3、線照射的細(xì)胞后，通過AnnexinV-EGFP標(biāo)記結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡比例有所降低，并且，隨著細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，維生素E抑制細(xì)胞凋亡的效果增強(qiáng)。 3.本實(shí)驗(yàn)采用Rh-123標(biāo)記結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，維生素E作用于紫外線照射誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞后，線粒體膜電位升高。但是，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，線粒體膜電位逐漸降低。由此可以推測(cè)，線粒體參與了維生素E抑制細(xì)胞凋亡的過程。 4.本實(shí)驗(yàn)通過檢測(cè)維生素E作用于紫外線照射誘導(dǎo)的

4、凋亡細(xì)胞的細(xì)胞周期，發(fā)現(xiàn)經(jīng)紫外線照射的細(xì)胞發(fā)生S期阻滯，導(dǎo)致G2/M期細(xì)胞的減少。而維生素E的作用可以逆轉(zhuǎn)紫外線照射誘導(dǎo)的S期阻滯，引起G2/M期細(xì)胞的增加。細(xì)胞在G2/M期比率的提高，允許細(xì)胞在有絲分裂以前有更多的時(shí)間進(jìn)行修復(fù)。維生素E處理的結(jié)果使細(xì)胞在G2/M期增加，所以維生素E可能通過調(diào)控細(xì)胞周期的分配進(jìn)而發(fā)揮抗凋亡的作用。 5.RT-PCR結(jié)果顯示紫外線作用后，bcl-2基因較對(duì)照組無明顯變化，bax、fas、caspa