2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPK)是一組可被多種信號激活的絲/蘇氨酸蛋白激酶。經(jīng)磷酸化活化的絲裂原活化蛋白激酶,可參與多種細胞生命活動,如調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄,誘導細胞凋亡、調(diào)節(jié)細胞周期等。MAPK誘導細胞凋亡的作用,尤其是誘導腫瘤細胞凋亡的作用,已成為人們關注的焦點?,F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)p38,ERK5,ERK以及JNK4個亞族。其中ERK,JNK,p38MAPK三條通路與腫瘤細胞凋亡關系密切。<

2、br>   JNK信號通路是MAPK中重要的通路之一。最近的研究表明,JNK通路的激活與促凋亡作用有關?;罨腏NK通過磷酸化c-Jun和ATF2激活轉(zhuǎn)錄因子AP1,結果導致FasL表達增強,促進細胞凋亡。JNK介導細胞凋亡的另一途徑是通過磷酸化Bcl-2和Bcl-xL,而后促進線粒體釋放細胞色素c,從而激活Caspase級聯(lián)反應,導致細胞凋亡。
   GCK分子屬于Ser/Thr蛋白激酶,有研究表明GCK分子參與了JNK信號

3、通路,且表達外源性的GCK分子可以在細胞內(nèi)活化JNK。而通過RNAi技術沉默gck基因可以阻斷LPS和UV刺激活化JNK的信號通路。但是GCK分子具體如何調(diào)控JNK信號通路尚待探討。因此本文通過克隆GCK基因和構建轉(zhuǎn)基因細胞,繼而初步觀察了紫外線照射對促進UV誘導細胞凋亡的作用機制。論文共分為兩部分。
   1、人GCK基因克隆及其轉(zhuǎn)基因細胞的構建
   目的:克隆人GCK基因,并構建含有該目的基因的plRES2-EGF

4、P-GCK重組質(zhì)粒載體,并獲得穩(wěn)定表達GCK分子的GCK-HEK293轉(zhuǎn)基因細胞。
   方法:以pCMV5-GCK質(zhì)粒為模板,PCR法獲得gck基因,將其裝入plRES2-EGFP質(zhì)粒載體中,脂質(zhì)體法共轉(zhuǎn)染HEK293細胞,用G418篩選出能穩(wěn)定表達GCK蛋白的GCK-HEK293轉(zhuǎn)基因細胞株。
   結果:成功構建了pIRES2-EGFP-GCK質(zhì)粒載體,并建立了穩(wěn)定表達人GCK蛋白的GCK-HEK293轉(zhuǎn)基因細胞株

5、。
   結論:構建了含人GCK基因的重組plRES2-EGFP-GCK質(zhì)粒載體和穩(wěn)定表達人GCK蛋白的GCK-HEK293轉(zhuǎn)基因細胞株,為該基因功能的后續(xù)研究奠定基礎。
   2、GCK分子對促進UV誘導HEK293細胞凋亡的研究
   目的:研究GCK分子促進UV誘導HEK293細胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導機制。
   方法:分別選取GCK-HEK293轉(zhuǎn)基因細胞、plRES2-HEK293轉(zhuǎn)基因細胞、HEK2

6、93細胞2×105個細胞接種于6孔板中,培養(yǎng)12h后,進行不同時間的UV照射。2min、4min、5min、6min。繼續(xù)培養(yǎng)24h。離心收集細胞,PI染色lmin,利用流式細胞術檢測細胞的死亡率。UV照射HEK293,5min,24h后,裂解細胞,收集上清檢測GCK分子的表達。
   結果:1.經(jīng)過不同時間UV的照射,在24h后,GCK-HEK293轉(zhuǎn)基因細胞與pIRES2-HEK29轉(zhuǎn)基因細胞和HEK293相比,細胞的死亡率

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