維生素E琥珀酸酯誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：維生素E琥珀酸酯(VitaminEsuccinate，VES；a-tocopherylSuccinate，a-TOS)是一種維生素E的衍生物，研究證實(shí)，VES對(duì)惡性腫瘤如B淋巴瘤、前列腺癌、子宮內(nèi)皮細(xì)胞癌、胃癌和結(jié)腸癌等都具有顯著的凋亡誘導(dǎo)作用，而對(duì)機(jī)體正常細(xì)胞無毒性。本研究旨在觀察VES對(duì)乳腺癌MCF-7(雌激素受體陽性)和MDA-MB-435(雌激素受體陰性)細(xì)胞的增殖抑制和凋亡誘導(dǎo)作用，并分析VES調(diào)控Fas蛋白的表達(dá)在凋亡

2、誘導(dǎo)過程中的作用。 方法：人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7(雌激素受體陽性)以及人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-435(雌激素受體陰性)以RPMI1640培養(yǎng)基孵育，至對(duì)數(shù)生長期時(shí)，分別以VES刺激12h，24h和48h，VES濃度為5μg/ml，10μg/ml和20μg/ml，用MTT法測(cè)定VES對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用；VES處理結(jié)束后，收集細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，加入碘化丙叮(PI)后以流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期并計(jì)算凋亡率的變化。為檢測(cè)Fas分

3、子在VES誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡過程中的作用，以Fas中和性抗體進(jìn)行阻斷實(shí)驗(yàn)。為檢測(cè)VES作用后Fas蛋白水平的變化，以5μg/ml，10μg/ml和20μg/mlVES處理乳腺癌細(xì)胞48h后，裂解乳腺癌細(xì)胞后收集蛋白并進(jìn)行定量分析，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白后以半干式電轉(zhuǎn)移將蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，以Western蛋白印跡法檢測(cè)Fas蛋白水平。由于細(xì)胞的凋亡主要由細(xì)胞表面的膜Fas介導(dǎo)，VES作用結(jié)束后加入PE標(biāo)記的Fas抗體，以流式

4、細(xì)胞儀分析熒光強(qiáng)度以測(cè)定細(xì)胞表面Fas表達(dá)水平的變化。 結(jié)果：VES對(duì)乳腺癌細(xì)胞的增殖抑制作用與雌激素受體的表達(dá)無關(guān)，MCF-7和MDA-MB-435乳腺癌細(xì)胞經(jīng)VES作用后均表現(xiàn)為顯著的抑制作用，并表現(xiàn)為時(shí)間和劑量依賴關(guān)系。MCF-7乳腺癌細(xì)胞的自然凋亡率為1.2％，5μg/ml，10μg/ml和20μg/ml的VES作用48h后凋亡率分別升高至11.2％，16.4％和41.2％；MDA-MB-435細(xì)胞的自然凋亡率為1.5％

5、，經(jīng)VES作用48h后凋亡率升高至13.1％、20.2％和46.5％。加入Fas中和性抗體與VES共同作用于乳腺癌細(xì)胞后，VES介導(dǎo)的凋亡誘導(dǎo)作用被明顯阻斷。經(jīng)Western蛋白印跡法檢測(cè)Fas蛋白水平發(fā)現(xiàn)，與未經(jīng)藥物處理的空白對(duì)照組細(xì)胞相比，5μg/ml，10μg/ml和20μg/mlVES作用48h后乳腺癌MCF-7細(xì)胞Fas蛋白水平分別升高2.3，2.7和2.9倍；而MDA-MB-435細(xì)胞Fas蛋白水平分別升高1.3、1.9和4

6、.3倍。不同濃度VES作用48h后MCF-7細(xì)胞表面Fas平均熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，由對(duì)照組的50.07升高至54.72、71.68和86.84；而MDA-MB-435細(xì)胞表面Fas平均熒光強(qiáng)度亦顯著增強(qiáng)，由對(duì)照組的46.29升高至59.66、84.54和103.41。 結(jié)論：VES對(duì)雌激素受體陽性與雌激素受體陰性的乳腺癌細(xì)胞均具有顯著的增殖抑制作用并表現(xiàn)為時(shí)間和劑量依賴關(guān)系，其增殖抑制作用主要與誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡有關(guān)。阻斷實(shí)驗(yàn)提示F