川芎嗪對長波紫外線誘導人皮膚成纖維細胞衰老的拮抗作用及其機制研究.pdf

1、目的:
　　本研究旨在通過觀察人皮膚成纖維細胞(Human Dermis Fibroblasts，HDF)的體外增殖活性、β-半乳糖苷酶染色陽性率、細胞內(nèi)活性氧類總量(Reactive oxygenspecies，ROS)、p53蛋白及MMP-1、MMP-3的mRNA表達等，探討川芎嗪對長波紫外線(Utraviolet A，UVA)反復照射誘導人皮膚成纖維細胞衰老的可能作用及其機制，為其進一步成為光防護成分并應用于光保護劑提供理論

2、依據(jù)。
　　方法:
　　第1部分:采用酶消化法從人包皮組織中分離培養(yǎng)成纖維細胞，對分離培養(yǎng)的細胞進行形態(tài)學鑒定，并選擇合適的傳代細胞進行實驗;低劑量UVA反復照射人皮膚成纖維細胞，連續(xù)照射5天，每天10J，采用CCK-8法檢測細胞增殖活性、染色法估算β-半乳糖苷酶表達量，探討反復UVA輻射對人皮膚成纖維細胞的作用。
　　第2部分:采用不同濃度的川芎嗪預處理人皮膚成纖維細胞后進行反復低劑量UVA照射，連續(xù)照射5天，每天1

3、0J，光學顯微鏡下觀察照射前后細胞形態(tài)的變化、CCK-8法檢測細胞增殖活性、β-半乳糖苷酶染色，探討川芎嗪對反復UVA輻射誘導人皮膚成纖維細胞衰老的拮抗作用，并采用流式細胞術(shù)檢測細胞內(nèi)ROS總量、Westernblot檢測p53蛋白表達、實時熒光定量PCR法檢測MMP-1、MMP-3的mRNA表達，探討川芎嗪抗皮膚衰老的可能作用機制。
　　結(jié)果:
　　第1部分:原代培養(yǎng)細胞光鏡下見細胞的形態(tài)從圓形、透亮逐漸伸展呈典型的梭形，

4、并逐漸匯合成魚群狀，交織成網(wǎng)狀，細胞生長快速、純度較高，狀態(tài)良好，符合為人皮膚成纖維細胞的生長形態(tài)。細胞生長潛伏期為0～1d，生長期為2～5天，平臺期為6～7d;反復UVA照射人皮膚成纖維細胞可誘導其出現(xiàn)增殖緩慢、β-半乳糖苷酶染色陽性率增加等老化現(xiàn)象。
　　第2部分:川芎嗪對正常人皮膚成纖維細胞的體外增殖活性無明顯促進或抑制作用，但對經(jīng)反復UVA照射后人皮膚成纖維細胞的體外增殖活性有明顯促進作用，并能降低其β-半乳糖苷酶染色陽性

5、率，且具有一定的劑量依賴性，與UVA組的差異比較均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。同時還發(fā)現(xiàn)川芎嗪能降低反復UVA照射誘導的人皮膚成纖維細胞內(nèi)ROS總量升高，以濃度為50μ g/ml、100μ g/ml時明顯，此兩組細胞ROS值能降低至接近假照射組，與UVA組比較有均統(tǒng)計學差異（P均＜0.05）;UVA反復照射后人皮膚成纖維細胞內(nèi)p53蛋白表達增加，與假照射組的差異比較有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而川芎嗪能降低UVA反復照射誘導的p53

6、蛋白表達，與UVA組比較，UVA+川芎嗪100μ g/ml和假照射組的p53蛋白表達量差異有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05），同時各川芎嗪濃度組的p53蛋白表達隨著藥物濃度的增加呈下降趨勢。反復UVA照射人皮膚成纖維細胞可誘導其MMP-1、MMP-3的mRNA表達增加，與假照射組的差異比較均有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05），而川芎嗪在一定濃度范圍內(nèi)能降低MMP-1、MMP-3的mRNA表達，與UVA組的差異比較均有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05）