人參皂苷Rd誘導(dǎo)人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過體外培養(yǎng)人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞，研究人參皂苷Rd（ginsenoside Rd，GS-Rd）對(duì)U251細(xì)胞凋亡的影響及可能的作用機(jī)制，為其在腦膠質(zhì)瘤方面的應(yīng)用提供基礎(chǔ)研究資料。
　　方法:體外培養(yǎng)U251細(xì)胞，設(shè)置GS-Rd濃度為10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L、40μmol/L、50μmol/L、60μmol/L、80μmol/L,MTT法檢測(cè)GS-Rd對(duì)U251細(xì)胞的增殖抑制率的影響，作用時(shí)間設(shè)為

2、24h、48h、72h，繪制細(xì)胞增殖抑制曲線確定作用時(shí)間，根據(jù)IC50確定GS-Rd的給藥濃度，實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組、溶媒組、GS-Rd低濃度組（20μmol/L）、GS-Rd中濃度組（40μmol/L）、GS-Rd高濃度組（80μmol/L）,藥物作用時(shí)間為48h，檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo);①不同濃度GS-Rd作用U251細(xì)胞48h，通過流式細(xì)胞術(shù)Annexin-V FITC/PI雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；②通過熒光相差顯微鏡觀察各實(shí)驗(yàn)組U251細(xì)胞生長

3、、形態(tài)學(xué)變化情況；③不同濃度GS-Rd作用U251細(xì)胞12h、24h、48h，通過Elisa法檢測(cè)U251細(xì)胞端粒酶活性的變化；④不同濃度GS-Rd作用U251細(xì)胞48h，通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）檢測(cè)U251細(xì)胞caspase-3、Bcl-2、hTERT表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：①GS-Rd在濃度為20~80μmol/L范圍內(nèi)對(duì)U251細(xì)胞均有一定的抑制作用，并且隨藥物濃度的增加其作用強(qiáng)度增強(qiáng)，有一定劑量依賴性，作用時(shí)

4、間設(shè)定為48h，根據(jù)IC50結(jié)果77.38μmol/L將GS-Rd組濃度設(shè)置為20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L；②GS-Rd在濃度為20~80μmol/L范圍內(nèi)可誘導(dǎo)U251細(xì)胞凋亡，溶媒組與空白對(duì)照組相比，其細(xì)胞凋亡率的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），GS-Rd濃度20μmol/L與空白對(duì)照組相比，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），GS-Rd濃度80μmol/L與空白對(duì)照組相比，其差異具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

5、<0.01）；③顯微鏡下觀察，與空白組與溶媒組相比，GS-Rd低、中、高劑量組可使U251細(xì)胞數(shù)目減少，出現(xiàn)細(xì)胞體積變小，變形，變圓，脫落，胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，凋亡晚期可見凋亡小體等凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，其作用強(qiáng)度有劑量依賴性；④溶媒組與空白對(duì)照組相比，處理U251細(xì)胞12h、24h、48h端粒酶活性變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與空白對(duì)照組相比，GS-Rd濃度20μmol/L作用U251細(xì)胞24h、48h端粒酶活性降低，其差異

6、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），而作用12h，其端粒酶活性變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；⑤與空白對(duì)照組相比，GS-Rd濃度40μmol/L，80μmol/L作用U251細(xì)胞12h、24h、48h端粒酶活性降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；⑥與空白組對(duì)照相比，各濃度GS-Rd作用U251細(xì)胞48h，Bcl-2 mRNA、hTERT mRNA表達(dá)顯著降低，其差異極具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），caspase-3 mRNA表達(dá)顯著提高，