鹽酸小檗堿誘導(dǎo)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251凋亡及其與HERG鉀離子通道的表達(dá)相關(guān)研究.pdf

1、目的:
　　探究鹽酸小檗堿(ber)對人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251細(xì)胞凋亡作用的影響,并且初步通過實(shí)驗(yàn)證明這種凋亡與調(diào)節(jié)HERG鉀離子通道基因和蛋白的表達(dá)相關(guān)研究。
　　方法:
　　在體外實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)人腦的膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251,先使用不同的濃度鹽酸小檗堿處理人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 U251,用四甲基偶氮唑溴鹽(MTT)染色觀察細(xì)胞抑制率;Hoechst33258熒光染色法觀察細(xì)胞核是否出現(xiàn)凋亡特征;流式細(xì)胞術(shù)(FCM)測定細(xì)胞的凋亡率

2、以及不同階段凋亡率的分布情況;利用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR(RT-PCR)法測定HERG鉀通道的mRNA表達(dá)情況;應(yīng)用免疫印跡法(Western Blotting)法檢測HERG鉀通道的蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　MTT法檢測結(jié)果顯示隨著鹽酸小檗堿濃度的增加細(xì)胞抑制率呈明顯的增加趨勢,表現(xiàn)出量效與時(shí)效關(guān)系,其24小時(shí)的半效抑制濃度(IC50)是(8.78±0.20)μmol/l;Hoechst33258熒光染色法觀察鹽酸小

3、檗堿處理組的細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞核固縮,核中出現(xiàn)濃染顆粒,有的核中央甚至整個(gè)核都發(fā)白,并且隨著藥物濃度的增大,這種現(xiàn)象更明顯,但對照組的細(xì)胞核均勻淡染;流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果表明隨著鹽酸小檗堿的劑量增加 U251細(xì)胞的早期凋亡率明顯增加,并且它的晚期凋亡率及壞死率逐漸增大,其中以早期凋亡為主(P<0.05);RT-PCR檢測結(jié)果表明不同濃度的鹽酸小檗堿處理后人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的HERG鉀通道的mRNA含量均表達(dá),而且隨著藥物濃度的增高而增高;W