Ref-1和NF-κB在氨基苷類抗生素耳蝸氧化損傷調控機制中的作用.pdf

1、中南大學博士學位論文Ref1和NFκB在氨基苷類抗生素耳蝸氧化損傷調控機制中的作用姓名：代洪申請學位級別：博士專業(yè)：耳鼻咽喉科學指導教師：伍偉景20070501博士學位論文中文摘要毛細胞無明顯缺失，各實驗組外毛細胞缺失程度從重到輕依次為：慶大霉素14日組慶大霉素水楊酸鈉14日組慶大霉素7日組慶大霉素水楊酸鈉7日組，各組間外毛細胞計數有顯著差異(P005)。(3)耳蝸切片免疫組化：對照組耳蝸螺旋器和螺旋神經節(jié)細胞Ref1呈弱陽性表達，主要

2、表達于細胞漿；慶大霉素7日組耳蝸RefI表達增強，并有較多胞核著色的細胞；慶大霉素水楊酸鈉7日組呈強陽性表達，主要表達于細胞核；慶大霉素14日組陽性表達程度較慶大霉素7日組弱，胞核陽性表達細胞數較少；慶大霉素水楊酸鈉14日組陽性表達程度介于慶大霉素7日組和14日組之問。各組灰度值有顯著性差異(Po01)。(4)WesternBlot檢N內參照pactin表達穩(wěn)定。對照組耳蝸Ref1蛋白有低強度表達；慶大霉素7日組表達明顯增強，慶大霉素水

3、楊酸鈉7日組表達最強；慶大霉素14日組表達輕度增強，慶大霉素水楊酸鈉14日組表達介于慶大霉素7日組和14日組之間。各組間蛋白電泳積分光密度值有顯著性差異(P001)。(5)RTPCR檢測：抽提耳蝸組織總RNA電泳結果OI)260／280在19～20之間。對照組耳蝸Ref1mRNA有低強度表達；慶大霉素7日組表達強度明顯增加，慶大霉素水楊酸鈉7日組表達強度最高；慶大霉素14日組表達輕度增強，慶大霉素水楊酸鈉14日組表達介于慶大霉素7日組和

4、14日組之間。各組mRNA電泳積分的光密度值有顯著性差異(Po01)。結論Ref1在正常豚鼠耳蝸螺旋器和螺旋神經節(jié)細胞的胞漿中輕度表達。慶大霉素給藥后早期耳蝸中Ref1蛋白和mRNA表達上調，并在部分細胞自胞漿向胞核內移位。同時給予抗氧化劑水楊酸鈉可進一步促使Ref1由胞漿向核內移位并顯著增強其mRNA和蛋白表達。各實驗組Ref1蛋白和mRNA的表達水平與外毛細胞數量及聽功能保存程度一致。上述結果提示在慶大霉素導致耳蝸損害的過程中，Re