mir-541及mir-301a對(duì)PC12細(xì)胞突觸發(fā)育的影響.pdf

1、目的：本研究通過(guò)神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)PC12細(xì)胞突觸發(fā)生，利用生物信息學(xué)技術(shù)，結(jié)合細(xì)胞培養(yǎng)、miRNA qPCR技術(shù)，以及RNA干擾等技術(shù)，研究與細(xì)胞生長(zhǎng)分化相關(guān)的gap43和synapsinI基因及其相關(guān)的miRNA在PC12細(xì)胞突觸發(fā)生中所發(fā)生的作用，為進(jìn)一步探明神經(jīng)元突觸發(fā)生中相關(guān)的miRNA的調(diào)控機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　 方法：(1)常規(guī)體外傳代培養(yǎng)PC12細(xì)胞，并用神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)使其長(zhǎng)出突起。(2)利用qPCR的方法和W

2、estern blot技術(shù)檢測(cè)gap43和synapsinI基因誘導(dǎo)前后的變化(3)利用生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測(cè)出與gap43和synapsinI基因相關(guān)的miRNA。(4)利用miRNA qPCR技術(shù)檢測(cè)出這些miRNA誘導(dǎo)前后的變化。(5)挑選其變化比較明顯的rno-mir-541和rno-mir-301a構(gòu)建過(guò)表達(dá)載體和合成干擾片段轉(zhuǎn)染入PC12細(xì)胞中，觀測(cè)其突觸的變化及其預(yù)測(cè)基因gap43和synasinI基因的變化。
　　

3、結(jié)果：(1)NGF在50ng/ml的濃度下誘導(dǎo)PC12細(xì)胞一周可生長(zhǎng)出茂盛的突起。(2)RT-PCR、qPCR、Western blot技術(shù)均顯示PC12細(xì)胞誘導(dǎo)后gap43基因和synapsinI基因的表達(dá)量較誘導(dǎo)前有所升高。(2)rno-mir-541、rno-mir-540、rno-mir-28與synapsinI基因呈負(fù)相關(guān)性。(3)rno-mir-301a、rno-mir-291a-5p、rno-mir-871、rno-mir

4、-742與gap43基因呈負(fù)相關(guān)性。(4)rno-mir-541過(guò)表達(dá)后，synapsinI基因表達(dá)下降，突觸長(zhǎng)度有顯著性的縮短；rno-mir-541干擾后，synapsinI基因表達(dá)有所升高，突觸長(zhǎng)度顯著性增長(zhǎng)。(5)rno-mir-301a過(guò)表達(dá)后，gap43基因表達(dá)下降，突觸長(zhǎng)度有顯著性的縮短；rno-mir-301a干擾后，gap43基因表達(dá)有所升高，突觸長(zhǎng)度有顯著性的增長(zhǎng)。
　　 結(jié)論：(1)gap43基因和syna

5、sinI基因?qū)C12細(xì)胞突起的發(fā)育有相關(guān)作用。(2)synapsinI基因與rno-mir-541、rno-mir-540、rno-mir-28具有負(fù)相關(guān)性。(3)gap43基因?yàn)閞no-mir-301a、rno-mir-291a-5p、rno-mir-871、rno-mir-742具有負(fù)相關(guān)性。(4)推測(cè)synapsinI基因可能為rno-mir-541的一個(gè)靶基因，rno-mir-541通過(guò)調(diào)控synapsinI基因進(jìn)而影響到了細(xì)