SLE患者外周血中miR-301a和Th17細(xì)胞的變化.pdf

1、目的:
　　通過檢測(cè)系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）患者和健康對(duì)照者外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclearcells，PBMC)中Th17細(xì)胞比例、miR-301a-3p與其靶基因PIAS3 mRNA的表達(dá)水平，分析miR-301a與PIAS3及Th17細(xì)胞的關(guān)系，初步探討SLE患者PBMC中miR-301a和Th17細(xì)胞的變化。
　　方法

2、:
　　1.從SLE患者和健康對(duì)照者外周血中分離血漿和PBMC，經(jīng)PMA、Ionomycin和莫能霉素培養(yǎng)5h后，經(jīng)過熒光抗體（FITC anti-humanCD3、PCY5 anti-human CD8和PE anti-human IL-17）標(biāo)記，采用流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometer，F(xiàn)CM)檢測(cè)SLE患者和健康對(duì)照者PBMC中Th17細(xì)胞的比例。
　　2.通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative rea

3、l-time polymerase chainreaction，qRT-PCR)檢測(cè)SLE患者與健康對(duì)照者PBMC中RORCmRNA和STAT3 mRNA的表達(dá)情況，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　3.用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)SLE患者與健康對(duì)照者血漿中IL-1β、IL-6和IL-23的濃度，然后分析這些細(xì)胞因子在SLE患者體內(nèi)的表達(dá)情況。
　　4.通過

4、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)SLE患者與健康對(duì)照者PBMC中PIAS3 mRNA和miR-301a-3p的表達(dá)水平。將PIAS3 mRNA的表達(dá)水平分別與Th17細(xì)胞比例、RORC mRNA和STAT3mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析;將miR-301a-3p的表達(dá)水平分別與Th17細(xì)胞比例、RORC mRNA和PIAS3 mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　結(jié)果:
　　1.與健康對(duì)照組（0.653±0.41

5、0％）相比，SLE組(1.881±0.680％)PBMC中的Th17比例顯著增高(P＜0.0001)。
　　2.與健康對(duì)照組相比，SLE組PBMC中RORCmRNA(0.008±0.004 vs0.020±0.015, P=0.0471)和STAT3 mRNA(0.099±0.067 vs0.284±0.226，p=0.0047)的表達(dá)水平顯著升高。
　　3.與健康對(duì)照組相比，SLE組外周血血漿中IL-1β(3.453±0.

6、955pg/mlvs8.431±3.592pg/ml, p＜0.0001)、IL-6(10.690±8.325pg/ml vs33.910±21.350pg/ml,p=0.0032)和IL-23(65.080±33.780pg/ml vs104.200±37.870pg/ml，p=0.0056)的濃度顯著升高。
　　4.與健康對(duì)照組相比，SLE組PBMC中PIAS3 mRNA(0.098±0.034 vs0.064±0.041，P

7、=0.0341)的表達(dá)水平顯著下調(diào)。下調(diào)的PIAS3 mRNA表達(dá)水平與上調(diào)的RORC mRNA水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.6818，P=0.0208);而且與上調(diào)的STAT3 mRNA水平也呈一定程度負(fù)相關(guān)(r=-0.5330，P=0.0607);PIAS3 mRNA的表達(dá)水平與Th17細(xì)胞比例也有負(fù)相關(guān)趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=-0.2912，P=0.3344)。
　　5.與健康對(duì)照組相比，SLE組PBMC中miR-301a-3

8、P(0.012±0.019 vs0.046±0.085，P=0.0434)的表達(dá)水平顯著升高。miR-301a-3P的表達(dá)水平與RORC mRNA的表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.6835，P=0.0070);與Th17細(xì)胞比例也呈明顯的正相關(guān)(r=0.6813，P=0.0103);而與PIAS3 mRNA的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.5604，P=0.0463)。
　　結(jié)論:
　　1.本研究發(fā)現(xiàn)SLE患者PBMC中Th17細(xì)胞表

9、達(dá)水平明顯增高，其特異性轉(zhuǎn)錄因子RORC和STAT3表達(dá)顯著上調(diào)，血漿中IL-1β、IL-6和IL-23水平明顯升高，提示SLE患者外周血中Th17細(xì)胞異常增加，并且與疾病發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。
　　2.SLE患者PBMC中miR-301a的表達(dá)水平明顯上調(diào)，而其特異性靶基因PIAS3的表達(dá)水平明顯下調(diào)，miR-301a與PIAS3呈負(fù)相關(guān)，miR-301a與Th17細(xì)胞比例呈現(xiàn)正相關(guān)。提示SLE患者PBMC中miR-301a的過表達(dá)