Geranylgeranylransferase Ⅰ介導(dǎo)BDNF對突觸發(fā)育的作用研究.pdf

1、目的：研究蛋白異戊二烯基轉(zhuǎn)移酶Geranylgeranyltransferase I(簡稱GGT)對神經(jīng)元突觸發(fā)育的影響及機(jī)制，為神經(jīng)元突觸發(fā)育機(jī)制提供新的理論依據(jù)。
　　方法：1.在培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中，用GGT特異性抑制劑GGTi-2147處理或用siRNA下調(diào)GGT特異性β亞基(GGTβ)的表達(dá)后，采用免疫熒光化學(xué)法，檢測神經(jīng)元突觸前標(biāo)志物Synapsin I和突觸后標(biāo)志物PSD-95聚集體的密度與熒光亮度(OD值)的變化，以

2、此兩參數(shù)作為神經(jīng)元突觸發(fā)育的指標(biāo)。2.用GGTi-2147或酪氨酸蛋白激酶受體抑制劑K252a和/或BDNF處理神經(jīng)元后，抽提神經(jīng)元膜蛋白，western blot檢測GGT底物Racl轉(zhuǎn)位到細(xì)胞膜上的水平。3.在培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中，用GGTi-2147和BDNF共處理神經(jīng)元后提取總蛋白，利用GST-pulldown檢測細(xì)胞內(nèi)Racl活性的變化；4.在培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中，用GGTi-2147處理或用siRNA下調(diào)GGTβ的表達(dá)后用BDN

3、F處理，采用免疫熒光化學(xué)法，檢測神經(jīng)元Synapsin1和PSD-95聚集體的密度與熒光亮度的變化；5.在培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中，過表達(dá)野生型Racl及不能被GGT修飾的Racl突變體，用BDNF處理后，免疫熒光化學(xué)法，檢測Synapsin1和PSD-95聚集體的數(shù)量與熒光亮度的變化。
　　結(jié)果：1.抑制GGT活性或下調(diào)GGT表達(dá)可抑制神經(jīng)元突觸的發(fā)育。2.BDNF促使GGT底物Racl向細(xì)胞膜轉(zhuǎn)位，并且使Racl活性增加，這種作用可

4、被GGTi-2147及K252a抑制，說明GGT可被BDNF激活，并且此作用具有特異性。3.BDNF對突觸發(fā)育的促進(jìn)作用可被GGTi-2147和GGTβ siRNA抑制。4.野生型Racl能夠促進(jìn)突觸的發(fā)育，Racl不能被GGT修飾的突變體不僅抑制突觸的發(fā)育，而且可以取消BDNF對突觸發(fā)育的促進(jìn)作用。
　　結(jié)論：GGT不僅促進(jìn)基礎(chǔ)狀態(tài)下的神經(jīng)元突觸發(fā)育作用，而且介導(dǎo)BDNF誘導(dǎo)的突觸發(fā)育。本研究揭示了BDNF通過激活GGT，促進(jìn)R