陳皮多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)表征及其清除自由基活性研究.pdf

1、陳皮為蕓香科柑桔屬植物橘（Citrus reticulate Blanco）及其栽培變種的干燥成熟果皮，別名橘皮。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)其主要成分進(jìn)行了大量的研究，但鮮見(jiàn)其多糖的研究報(bào)道。本文選取水溶性陳皮多糖為研究對(duì)象，確定其提取和分離純化工藝，分析分離得到的各組分理化特性，并初步探討陳皮多糖的體外抗氧化活性，以企為民間醫(yī)藥的深入開(kāi)發(fā)提供理論基礎(chǔ)。主要研究?jī)?nèi)容如下： 1. L9(34)正交法考察陳皮多糖的最佳提取工藝，發(fā)現(xiàn)陳皮水溶性多糖

2、的適宜提取條件為固液比1:10、提取溫度100℃、提取時(shí)間6h，在此條件下多糖提取率為7.61％。為了進(jìn)一步純化水提醇沉得到的陳皮粗多糖，采用聚酰胺脫色、Sevag法脫蛋白、透析處理，獲得精制多糖（PSP）。含量測(cè)定表明PSP總糖含量為17.80％，半乳糖醛酸含量為28.38％，還原糖含量為3.59％，蛋白質(zhì)含量為0.99％。Β-消除反應(yīng)說(shuō)明PSP有O-糖苷連接，剛果紅實(shí)驗(yàn)說(shuō)明PSP分子存在螺旋構(gòu)象。 2. 陳皮多糖PSP經(jīng)DE

3、AE-cellulose陰離子交換柱梯度洗脫，分離得到四個(gè)組分：PSM、PSE、PST、PSF。凝膠滲透色譜與旋光度測(cè)定結(jié)果表明：四組分為均一多糖，重均分子量依次約為0.8×104 Da、1.1×105 Da、2.1×105 Da及2.1×105 Da；比旋度依次為–128°、+145°、+201°、+189°。單糖組成分析發(fā)現(xiàn)：PSM主要含有Glu和Gal，摩爾比為1:1.1；PSE主要含有Ara和Gal，摩爾比為1:1.2；PST主

4、要含有Rha；PSF主要含有Rha、Ara和Gal，摩爾比為1.5:1:1.1。結(jié)合TLC對(duì)陳皮粗多糖的單糖組成分析結(jié)果推斷，陳皮多糖是一種組分復(fù)雜的雜多糖，單糖組成有6種，其中Rha、Ara、Glu和Gal所占的比例較大。傅里葉紅外圖譜分析表明：PSM是一種帶有結(jié)晶水的低分子多糖，結(jié)構(gòu)中存在β-型吡喃糖苷鍵；PSE、PST和PSF結(jié)構(gòu)相似，是部分羧酸甲酯化的α-半乳糖醛酸多聚糖。 3. 陳皮多糖主組分PST經(jīng)SephadexG

5、-75凝膠柱層析進(jìn)一步純化，得到一亞組分PST-a。凝膠滲透色譜與瓊脂糖凝膠電泳分析表明PST-a為單一組分，重均分子量為1.0×105Da。從酸水解、IR、1H-NMR及13C-NMR分析結(jié)果推斷：PST-a是分支較少的雜多糖，主鏈由(1→4)-α-D-GalA構(gòu)成，存在2-O-和3-O-乙酰基，部分半乳糖醛酸被甲酯化，鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖等以α-吡喃糖形式存在于末端或側(cè)鏈。 4. 以抗壞血酸為陽(yáng)性對(duì)照，采用Fenton反