金線蓮多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)表征及其抗腫瘤活性.pdf

1、本論文采用超聲法提取金線蓮多糖(A.roxburghii Polysaccharide， ARPS)并測(cè)定其含量；同時(shí)應(yīng)用高速逆流色譜(High-speed counter currentchromatography，HSCCC)分離純化ARPS，并對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析和表征；應(yīng)用柱前衍生化高效液相色譜法(High performance liquid chromatography，HPLC)分析ARPS的單糖組成及其摩爾比。體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)A

2、RPS對(duì)5種腫瘤細(xì)胞增殖的抑制率，并研究對(duì)抑制作用最強(qiáng)的K562細(xì)胞的形態(tài)學(xué)影響，初步探討其作用機(jī)制。
　　 本實(shí)驗(yàn)分為四部分：
　　 (一)金線蓮多糖苯酚-硫酸法測(cè)定條件的優(yōu)化用超聲法提取ARPS，以苯酚-硫酸法進(jìn)行含量測(cè)定，葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，檢測(cè)波長(zhǎng)為490 nm，利用正交設(shè)計(jì)方法對(duì)測(cè)定條件進(jìn)行優(yōu)化，最佳測(cè)定條件為1.0 mL樣液，加5％苯酚液0.6 mL、硫酸6.0 mL，100℃水浴保溫15 min，測(cè)得金線蓮超聲

3、提取物中粗多糖含量為12.09％。
　　 (二)高速逆流色譜分離純化金線蓮多糖及其結(jié)構(gòu)表征采用HSCCC分離純化ARPS。兩相溶劑系統(tǒng)為：12.5％PEG1000-20％磷酸鉀(pH=6.8)雙水相體系，逆流色譜儀轉(zhuǎn)速為850 r/min，流動(dòng)相流速1.0 mL/min，固定相保留率30.3％。從100 g金線蓮粉末中分離純化得到2 g ARPS。經(jīng)紫外光譜分析、凝膠柱層析法分析示ARPS是分子量分布均一的多糖組分。測(cè)定得其分子

4、量為18197，柱前衍生化高效液相色譜法分析其單糖是由甘露糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖和巖藻糖組成，且這5種單糖的摩爾比值為4.43∶14.04∶1.00∶2.28∶6.58。
　　 (三)金線蓮多糖抗腫瘤作用體外實(shí)驗(yàn)ARPS對(duì)人慢性白血病粒細(xì)胞K562、肝癌HepG-2、胃癌SGC-7901、胃癌MGC-803和大腸癌HCT-116細(xì)胞株生長(zhǎng)的影響，采用CCK-8法檢測(cè)ARPS對(duì)這5種腫瘤細(xì)胞增殖的抑制率，發(fā)現(xiàn)ARPS對(duì)胃癌M