顱腦損傷早期腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接的變化及其意義.pdf

1、顱腦損傷是當(dāng)今發(fā)達(dá)及發(fā)展中國家年輕人死亡和致殘的主要原因，已成為影響全世界健康和社會經(jīng)濟(jì)的主要危害之一。顱腦損傷分為原發(fā)性損傷和繼發(fā)性損傷。繼發(fā)性腦損傷發(fā)生于傷后數(shù)小時至數(shù)天，腦水腫是常見的繼發(fā)性腦損傷之一，常造成顱內(nèi)壓增高和腦血流灌注減少，加重腦組織缺氧缺血，從而形成惡性循環(huán)，最終造成腦組織不可逆的損壞，是顱腦損傷患者致死和致殘的主要原因。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，顱腦損傷后腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接在腦水腫的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用，同時，減

2、低顱腦外傷患者的死亡率和致殘率的關(guān)鍵在于創(chuàng)傷早期正確的的臨床干預(yù)已成為共識。眾多研究顯示rhEPO能保護(hù)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞，減低BBB通透性，但關(guān)于其保護(hù)機(jī)制尚不清楚。rhEPO是否通過保護(hù)TJ而減低BBB通透性則鮮有文獻(xiàn)報道。
　　 第一部分大鼠顱腦損傷早期腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接的變化及其意義
　　 目的：通過觀察大鼠顱腦損傷早期腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接的動態(tài)變化，探討顱腦損傷早期血腦屏障的改變在繼發(fā)性腦損傷發(fā)生發(fā)展中

3、的作用及其可能機(jī)制。
　　 方法：成年健康SD大鼠72只，完全隨機(jī)分為假手術(shù)（9只）和打擊組（63只)。打擊組參照并改良Mamourou法制作大鼠閉合性顱腦損傷模型，假手術(shù)組只切開皮膚，不作打擊。分別于致傷后1小時、3小時、6小時、12小時、24小時、3天、7天從兩組中隨機(jī)取大鼠9只，其中3只用于通過伊文氏藍(lán)(EB)染色和分光光度儀測定腦組織EB含量檢測BBB完整性；3只采用免疫組化方法，觀察TJ蛋白免疫染色陽性血管；3只采用透

4、射電鏡觀察微血管超微結(jié)構(gòu)和實(shí)時熒光定量PCR檢測緊密連接蛋白(閉合蛋白(Claudin-5)、咬合蛋白(Occludin)和閉鎖小帶蛋白(ZO-1))mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：打擊組傷后3小時腦組織EB含量開始增加，至傷后3天達(dá)高峰，隨后逐漸下降，7天后接近正常；傷后3小時，電鏡下可見腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞間隙增大，緊密連接密度減低，開放增加，至傷后3天達(dá)高峰，7天后接近正常；3h～3d的免疫陽性染色血管逐漸減少，染色程度變淺，閉

5、合蛋白(Claudin-5)、咬合蛋白(Occludin)和閉鎖小帶蛋白(ZO-1)mRNA的表達(dá)顯著低于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　 結(jié)論：顱腦損傷早期，腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接相關(guān)蛋白的變化，可引起B(yǎng)BB通透性的改變，是血管源性腦水腫發(fā)生發(fā)展和中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境紊亂的主要病理基礎(chǔ)；緊密連接及其相關(guān)蛋白在顱腦損傷早期表達(dá)變化的規(guī)律符合臨床腦水腫發(fā)展趨勢；著眼于腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接的相關(guān)治療，有可能維持

6、BBB的正常通透性，阻止血管源性腦水腫的發(fā)生發(fā)展，減少或減輕繼發(fā)性腦損傷，達(dá)到改善預(yù)后的目的。
　　 第二部分rhEPO對大鼠顱腦損傷早期腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接的保護(hù)作用
　　 目的：通過觀察大鼠顱腦損傷后早期應(yīng)用rhEPO對腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接及其相關(guān)蛋白的影響，探討rhEPO對顱腦損傷早期腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制。
　　 方法：成年健康SD大鼠126只，隨機(jī)分為打擊組和打擊+rhEPO組，每組

7、63只，兩組均參照改良Mamourou法制作大鼠閉合性顱腦損傷模型。打擊+rhEPO組傷在打擊后即刻經(jīng)腹腔注射rhEPO注射液(3000IU/kg)，以后每24小時腹腔注射一次直至被處死，打擊組注射等量生理鹽水。分別于致傷后1小時、3小時、6小時、12小時、24小時、3天、7天從兩組中隨機(jī)取大鼠9只，其中3只用于伊文氏藍(lán)(EB)染色和分光光度儀檢測腦組織EB含量；3只采用免疫組化方法，觀察TJ蛋白免疫染色陽性血管；3只采用實(shí)時熒光定量P

8、CR檢測緊密連接蛋白(閉合蛋白(Claudin-5)、咬合蛋白(Oecludin)和閉鎖小帶蛋白(ZO-O))mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：傷后3h～3d，打擊+rhEPO組腦組織EB含量顯著低于同時間點(diǎn)打擊組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；免疫陽性染色血管增多，染色程度變深，閉合蛋白(Claudin-5)、咬合蛋白(Occludin)和閉鎖小帶蛋白(ZO-1)mRNA的表達(dá)顯著高于同時．間點(diǎn)打擊組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0