缺氧誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞源性血管內(nèi)皮生長因子對(duì)共培養(yǎng)的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：建立星形膠質(zhì)細(xì)胞與腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)模型，研究星形膠質(zhì)細(xì)胞源性VEGF對(duì)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響。 方法：(1) 分離純化 Wistar 大鼠大腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞 (astrocyte，Ast) 和腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 (brain microvascular endothelial cell，BMEC)。GFAP 抗體免疫熒光和第八因子相關(guān)抗原(ⅧF-Ag) 免疫熒光分別鑒定。(2) 純化的星形膠質(zhì)細(xì)胞置于缺氧環(huán)境培養(yǎng)30

2、min 后復(fù)氧，RT-PCR檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞中 VEGFmRNA 的表達(dá)，并與正常培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞作對(duì)照。 (3)利用 Transwell 建立體外星形膠質(zhì)細(xì)胞、腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)模型，觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞源性VEGF對(duì)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移及LDH漏出率的影響。 結(jié)果：(1)獲得了純度分別是95％、90％的星形膠質(zhì)細(xì)胞和腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞，符合實(shí)驗(yàn)要求。(2)正常培養(yǎng)的腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞有VEGF表達(dá)，但表達(dá)率較低。(3)缺氧/

3、復(fù)氧后 VEGFmRNA 的表達(dá)增強(qiáng)，呈時(shí)間依賴性，8h 達(dá)高峰，與對(duì)照組相比有顯著差別(P<0.01)，隨后逐漸降低。(4)星形膠質(zhì)細(xì)胞源性VEGF可促使腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生遷移并增加其LDH的漏出率，此作用可被sFlt終止。 結(jié)論：慢性缺血性腦血管疾病常會(huì)伴隨著血管新生，并受血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor VEGF) 調(diào)節(jié)。我們的研究顯示：缺氧可明顯誘導(dǎo)腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)