腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞對神經(jīng)干細(xì)胞分化與凋亡的影響.pdf

1、目的：觀察不同比例的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(vascular endothelial cell，VEC)對體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞(Neural stem cells，NSCs)分化與凋亡的影響。 方法：采用機(jī)械方法，從新生大鼠腦組織中分離神經(jīng)干細(xì)胞及腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。傳二代后對NSCs進(jìn)行Nestin免疫組化染色鑒定，用Ⅷ因子相關(guān)抗原對VEC進(jìn)行免疫組化鑒定。然后進(jìn)行VEC與NSCs共同培養(yǎng)，在普通培養(yǎng)板中VEC與NSCs接種比

2、例分別為：1：100、1：10、1：1、10：1、100：1，各組按常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)方法進(jìn)行換液、傳代分瓶、細(xì)胞計數(shù)。隔馬在倒置顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察，共培養(yǎng)14天后采用免疫組化方法及免疫熒光技術(shù)觀察NSC分化及凋亡情況。以微管相關(guān)蛋白(MAP-2)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)及caspas分別作為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞與凋亡的標(biāo)志。以1 00倍視野倒置顯微鏡對免疫組化染色的NSC進(jìn)行計數(shù)(每視野面積為0.196mm作為計數(shù)面積)。每組

3、細(xì)胞均進(jìn)行6孔NSC的培養(yǎng)，每孔隨機(jī)選4個視野計數(shù)MAP-2、GFAP及caspas陽性細(xì)胞數(shù)。 結(jié)果：腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞共培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞定向分化為神經(jīng)元的數(shù)量明顯高于對照組(P<0.05)；定向分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量顯著低于對照組(P<0.05)；且腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞以1：10比例共培養(yǎng)時最為顯著(P<0.05)；神經(jīng)干細(xì)胞凋亡數(shù)顯著低于對照組(P<0.05)，但各共培養(yǎng)組間無顯著差異(P>0.05)。