MicroRNA-146a在重癥肌無力中的作用研究.pdf

1、目的:檢測(cè)MG患者PBMCs中miRNA-146a的表達(dá)水平;研究抑制miRNA-146a后對(duì)Torpedo AchRα146-162(Tα)肽段刺激后的小鼠AchR特異性B細(xì)胞活化的影響及可能機(jī)制，探討miRNA-146a在MG中的作用，尋找抑制MG中AchR特異性免疫反應(yīng)的治療新方法。
　　 方法:以熒光定量PCR檢測(cè)MG患者組及健康對(duì)照組PBMCs中miR-146a的表達(dá)水平。合成miR-146a的反義互補(bǔ)鏈Antagom

2、iR-146a片段作為抑制劑，并以結(jié)構(gòu)相似的無意義片段作為對(duì)照物;免疫磁珠分選小鼠脾臟B、T細(xì)胞并測(cè)定細(xì)胞純度及活性;脂質(zhì)體HiPerFect負(fù)載FITC標(biāo)記的AntagomiR-146a轉(zhuǎn)染B細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率;設(shè)置空白組、Tα組、Tα+抑制劑組、Tα+對(duì)照組，將T、B細(xì)胞按照1∶3比例共培養(yǎng)2天后，除空白組外均予以Tα刺激，同時(shí)Tα+抑制劑組予以AntagomiR-146a、Tα+對(duì)照組予以對(duì)照物干預(yù)。干預(yù)后第3天分選B細(xì)

3、胞，熒光定量PCR檢測(cè)miR146a的表達(dá)水平、流式檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志CD40、CD80、CD86的表達(dá)水平;Western Blot檢測(cè)TLR4、NF-κB及Bcl-2的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:1.MG患者組較健康對(duì)照組PBMCs中miR-146a的表達(dá)水平顯著增高(P=0.004)。
　　 2.分選后B、T細(xì)胞純度分別為97.1％、96.7％，增殖反應(yīng)示細(xì)胞活性正常，脂質(zhì)體HiPerFect負(fù)載AntagomiR-14

4、6a轉(zhuǎn)染B細(xì)胞的結(jié)合率達(dá)65.8％，滿足實(shí)驗(yàn)要求。
　　 3.Tα組較空白組B細(xì)胞miR-146a表達(dá)水平顯著增高(P＜0.001);Tα+抑制劑組較Tα組miR-146a表達(dá)水平顯著降低(P＜0.001);Tα+對(duì)照組與Tα組miR-146a表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.948)。
　　 4.Tα組較空白組B細(xì)胞CD40、CD80、CD86表達(dá)水平顯著增高;Tα+抑制劑組較Tα組CD40、CD80表達(dá)水平顯著降低，

5、CD86表達(dá)無明顯差異;Tα+對(duì)照組與Tα組CD40、CD80及CD86表達(dá)水平無明顯差異。
　　 5.Tα組較空白組B細(xì)胞TLR4、NF-κB表達(dá)水平顯著增高(P＜0.001);Tα+抑制劑組較Tα組TLR4、NF-κB表達(dá)水平顯著降低(P＜0.001); Tα+對(duì)照組TLR4、NF-κB表達(dá)水平及各組間Bcl-2表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　 結(jié)論:1.MG患者PBMCs中miR-146a的表達(dá)水平