黃連人參對藥改善2型糖尿病胰島素抵抗機(jī)制研究.pdf

1、本課題基于中醫(yī)藥治療2型糖尿病胰島素抵抗(insulinresistance，IR)的臨床實踐經(jīng)驗，將《內(nèi)經(jīng)》“壯火食氣”病機(jī)理論應(yīng)用于2型糖尿病IR治療實踐和實驗研究，提出治療2型糖尿病IR存在火熱傷正病機(jī)，可采用“熱者寒之”的治療原則，應(yīng)用瀉火補氣治法進(jìn)行治療。選用臨床有效的黃連人參藥對作為治療藥物，觀察其對2型糖尿病IR和繼發(fā)的β細(xì)胞功能損害的影響。探討2型糖尿病“壯火食氣”病機(jī)和瀉火解毒與補氣扶正治法的治療作用，為建立中醫(yī)藥治療

2、的新理論提供基礎(chǔ)。 1文獻(xiàn)研究：全面查閱了近年來國內(nèi)外2型糖尿病IR、過氧化物酶體增殖激活受體(PPAR)γ研究、實驗性2型糖尿病IR動物模型的相關(guān)研究文獻(xiàn)資料，對目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和中醫(yī)學(xué)對于2型糖尿病IR的發(fā)病機(jī)理、治療用藥、研究方法；對于PPARγ的近期研究成果；動物模型的建立及研究方法等概況進(jìn)行了較為系統(tǒng)的總結(jié)和綜述，掌握了相關(guān)項目科研前沿動態(tài)。 2理論研究：在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，選取IR作為中醫(yī)藥治療2型糖尿病的切入點，

3、綜述了目前清熱瀉火補氣扶正治法在2型糖尿病IR臨床治療中的應(yīng)用現(xiàn)狀，并對2型糖尿病IR發(fā)生發(fā)展的中醫(yī)病機(jī)進(jìn)行了闡述，在以往認(rèn)識的基礎(chǔ)上提出了IR及其相關(guān)病證“壯火食氣”的病機(jī)假說和瀉火解毒祛邪與補氣扶正相結(jié)合的治法，對于闡發(fā)2型糖尿病IR的中醫(yī)病因病機(jī)，尋找積極有效的治療方法具有重要意義，豐富了2型糖尿病IR的中醫(yī)病機(jī)學(xué)及治法學(xué)內(nèi)容。 3實驗研究研究目的：觀察黃連人參對藥對實驗性2型糖尿病IR大鼠的治療作用及機(jī)制。 研究

4、方法：以長期高糖高脂飲食喂養(yǎng)加小劑量鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射的方法復(fù)制實驗性2型糖尿病IR大鼠動物模型，應(yīng)用黃連人參對藥對其進(jìn)行干預(yù)，以吡格列酮作為陽性對照藥，觀察藥物對實驗性2型糖尿病IR大鼠糖代謝、脂代謝、胰島素敏感性、胰腺病理形態(tài)學(xué)、腫瘤壞死因子(TNF)-α水平、游離脂肪酸(FFA)水平和PPARγ基因表達(dá)等的影響。 研究結(jié)果：①模型評價：成功復(fù)制了實驗性2型糖尿病IR大鼠模型，該實驗?zāi)Ｐ蛣游锉憩F(xiàn)為高血糖、高胰島素血

5、癥、高FFA和高水平TNF-α，其胰島素作用指數(shù)(IAI)明顯低于正常動物，不僅表現(xiàn)IR，且有部分胰島β細(xì)胞功能受損，符合2型糖尿病IR臨床特點。藥物治療后，其檢測結(jié)果均有不同程度的改善，用以評價藥物療效結(jié)果可信。可操作性強(qiáng)，死亡率低，成功率高，經(jīng)濟(jì)成本適宜，為研究2型糖尿病及IR的理想載體。②基礎(chǔ)藥效研究：在成功建立實驗性2型糖尿病IR大鼠模型的基礎(chǔ)上，觀察黃連人參對藥對于實驗性2型糖尿病IR大鼠糖、脂代謝以及胰腺病理形態(tài)學(xué)、主要肝功

6、能指標(biāo)改變的影響。糖代謝指標(biāo)血清生化檢測結(jié)果表明，黃連人參對藥能夠明顯降低模型動物空腹血糖水平，降低空腹胰島素水平，改善IR，其作用效果與陽性對照藥鹽酸吡格列酮效果相當(dāng)。脂代謝指標(biāo)血清生化學(xué)檢測結(jié)果表明，黃連人參對藥能夠明顯降低血清膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白-膽固醇含量，升高高密度脂蛋白-膽固醇含量，對脂肪代謝的調(diào)節(jié)作用與鹽酸吡格列酮效果相當(dāng)。胰腺組織HE染色結(jié)果顯示，黃連人參對藥對于長期高糖高脂飲食加STZ腹腔注射誘導(dǎo)的胰島數(shù)目較

7、少，胰島內(nèi)形態(tài)欠規(guī)則，細(xì)胞排列紊亂，常有細(xì)胞缺失、塌陷；胰島內(nèi)β細(xì)胞的脫顆粒現(xiàn)象，少數(shù)細(xì)胞塌陷、缺失，排列不規(guī)則等現(xiàn)象具有一定改善保護(hù)作用。胰島β細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色結(jié)果，胰島素染色顆粒較少，β細(xì)胞松散排列，分布不規(guī)則，有的胞漿中胰島素染色顆粒明顯減少使細(xì)胞呈空虛狀態(tài)在用藥后有不同程度的改觀。肝功能主要指標(biāo)血清生化學(xué)檢測結(jié)果表明，黃連人參對藥對肝功能指標(biāo)無不良影響。③機(jī)理探討：在基礎(chǔ)藥效學(xué)試驗研究基礎(chǔ)上，進(jìn)行藥物作用機(jī)理探討。采用免疫組

8、化法分析黃連人參對藥對實驗性2型糖尿病IR大鼠血TNF-α水平的影響。結(jié)果顯示，黃連人參對藥可以顯著降低實驗大鼠血TNF-α水平，其作用效果與鹽酸吡格列酮作用相似。提示黃連人參對藥可能通過降低TNF-α水平，解除TNF-α對脂肪和肌肉細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運子(GLUT)4的表達(dá)抑制、胰島素受體自身磷酸化及第二信使的活化抑制、刺激脂肪分解等作用，從而升高胰島素敏感性。采用比色法分析黃連人參對藥對實驗性2型糖尿病IR大鼠血FFA水平的影響。結(jié)果顯示

9、黃連人參對藥可明顯降低實驗大鼠血FFA水平，作用效果與鹽酸吡格列酮作用相似。提示黃連人參對藥可能通過降低脂毒性對機(jī)體的損害而達(dá)到改善IR及糖、脂代謝異常的作用。采用RT-PCR產(chǎn)物半定量技術(shù)分析黃連人參對藥對實驗性2型糖尿病IR大鼠脂肪組織PPARγ基因表達(dá)的影響。結(jié)果表明黃連人參對藥可以上調(diào)實驗大鼠脂肪組織PPARγ基因表達(dá)，其作用與鹽酸吡格列酮相似。提示黃連人參對藥可能與鹽酸吡格列酮相似，通過激活脂肪組織中的PPARγ，減少FFA釋