不同長鏈脂肪酸在Caco-2細(xì)胞中轉(zhuǎn)運(yùn)及機(jī)制研究.pdf

1、乳糜微粒作為富含甘油三酯的脂蛋白顆粒，其組裝和分泌只發(fā)生于腸上皮細(xì)胞內(nèi)，是膳食中的脂質(zhì)吸收進(jìn)入淋巴循環(huán)進(jìn)而進(jìn)入血液循環(huán)的唯一方式。高甘油三脂血癥會引發(fā)各種健康疾病，同時(shí)，它也是引發(fā)代謝綜合征的一個潛在因素。值得注意的是，長鏈脂肪酸(Long-chainfattyacid，LCFA)是磷脂、甘油三脂和膽固醇的基本成分。本試驗(yàn)通過研究長鏈飽和脂肪酸棕櫚酸(Palmitinicacid,PLA)、以及長鏈n-3多不飽和脂肪酸二十碳五烯酸(Ei

2、cosapentaenoicacid,EPA)和二十二碳六烯酸(Docosahexaenoicacid，DHA)對腸道上皮細(xì)胞乳糜微粒的分泌、甘油三酯的重新合成和分泌、以及脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的影響，旨在探討不同長鏈脂肪酸在腸道上皮細(xì)胞中的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。
　　1、不同長鏈脂肪酸對腸道上皮細(xì)胞乳糜微粒分泌的影響。Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)21d后，分別用100μM、200μM和400μM的長鏈脂肪酸[1-14C]PLA、[1-14C]EPA和[

3、1-14C]DHA處理24h。24h后收集細(xì)胞培養(yǎng)液，采用超速離心法測定細(xì)胞培養(yǎng)液中乳糜微粒(Chylomicron，CM)含量。結(jié)果表明，與對照組相比，各處理組隨著脂肪酸濃度升高，腸道上皮細(xì)胞乳糜微粒分泌量極顯著增加(P＜0.01);分別在100μM、200μM和400μM，PLA處理組乳糜微粒分泌量均顯著高于EPA組和DHA組(P＜0.01);在100μM時(shí)，EPA處理組和DHA處理組CM分泌量無顯著差異(P＞0.05)，在200μ

4、M和400μM時(shí)，DHA處理組CM分泌量顯著低于EPA處理組(P＜0.01)。這些結(jié)果表明，與飽和脂肪酸PLA相比，長鏈n-3多不飽和脂肪酸EPA和DHA能有效降低腸道上皮細(xì)胞乳糜微粒的分泌;200μM和400μM濃度下，更長鏈的DHA的抑制作用比EPA更強(qiáng)。
　　2、不同長鏈脂肪酸對腸道上皮細(xì)胞甘油三脂重新合成和分泌的影響。Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)21d后，分別用100μM、200μM和400μM的長鏈脂肪酸PLA、EPA和DHA處

5、理24h。24h后收集細(xì)胞和培養(yǎng)液，收集前4h，向培養(yǎng)液中加入139μL[1，2，3-3H]glycerol（[1，2，3-3H]甘油），檢測細(xì)胞內(nèi)甘油三脂(Triglyceride，TG)重新成量和培養(yǎng)液中的分泌量。結(jié)果顯示，與對照組相比，各處理組隨著脂肪酸濃度升高（100μM、200μM和400μM），腸道上皮細(xì)胞甘油三脂重新合成和分泌量極顯著升高(P＜0.01);分別在100μM、200μM和400μM，PLA處理組甘油三脂重新合

6、成和分泌的量均顯著高于EPA組和DHA組(P＜0.01);在100μM時(shí)，EPA處理組和DHA處理組甘油三脂重新合成和分泌的量無顯著差異(P＞0.05)，在200μM和400μM時(shí)，DHA處理組甘油三脂重新合成和分泌的量顯著低于EPA處理組(P＜0.01)。這些結(jié)果表明，與飽和脂肪酸PLA相比，長鏈n-3多不飽和脂肪酸EPA和DHA能有效降低腸道上皮細(xì)胞甘油三脂重新合成和分泌量;200μM和400μM濃度下，更長鏈的DHA的抑制甘油三脂

7、重新合成和分泌的量作用比EPA更強(qiáng)。
　　3、不同長鏈脂肪酸對腸道上皮細(xì)胞脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的影響。細(xì)胞培養(yǎng)21d后，分別用100μM、200μM和400μM的長鏈脂肪酸PLA、EPA和DHA處理Caco-2細(xì)胞24h。24h后收集細(xì)胞，采用定量PCR方法測定細(xì)胞內(nèi)脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因（PPARα、CD36、L-FABP、DGAT1、和MTP）mRNA的表達(dá)量。結(jié)果表明，隨著脂肪酸濃度升高，PLA、EPA和DHA均顯著上調(diào)了PPAR

8、α、L-FABP、DGAT1和MTPmRNA表達(dá)量(P＜0.01);在200μM時(shí)和400μM時(shí)，EPA和DHA處理組PPARα、L-FABP、DGAT1mRNA表達(dá)量顯著高于PLA處理組(P＜0.05);在100μM和400μM脂肪酸處理時(shí)，EPA和DHA處理組MTPmRNA表達(dá)量顯著高于PLA處理組(P＜0.05)。這些結(jié)果表明，隨脂肪酸濃度增加，基因表達(dá)量以劑量依賴效應(yīng)增加;值得注意的是，EPA和DHA對PPARα、L-FABP、