DNA甲基化介導(dǎo)的MAGE-A1基因在肝癌細胞中轉(zhuǎn)錄沉默的初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、腫瘤抗原MAGE-A1(Melanoma Antigen,Family A,1)在多種腫瘤中都有表達,而在除睪丸之外的正常組織中不表達.因此,這種腫瘤特異性表達就使得MAGE-A1成為一個可以運用于腫瘤基因治療的候選基因.在肝細胞肝癌中,MAGE-A1常過量表達,并在啟動子區(qū)域呈低甲基化狀態(tài);為了解DNA甲基化介導(dǎo)的基因沉默機制,我們從如下幾方面分析了細胞中基因啟動子的功能:(1)應(yīng)用半定量RT-PCR檢測該基因在肝癌細胞株中的表達水平

2、;(2)應(yīng)用甲基化特異性PCR(Methylation Specific PCR,MSP)檢測該基因啟動子區(qū)CpG島在肝癌細胞株中的甲基化狀態(tài);(3)應(yīng)用甲基化特異性PCR檢測CpG島中各個位點在BEL-7402和HepG2中的甲基化狀態(tài);(4)應(yīng)用體外甲基化配合定點突變的方法,通過瞬時轉(zhuǎn)染與熒光素酶報告基因檢測,確定5個特殊CpG位點的關(guān)鍵性;(5)通過5'-缺失突變與連接掃描突變的方法,通過瞬時轉(zhuǎn)染與熒光素酶報告基因檢測,進一步分析

3、了與該基因表達調(diào)控有關(guān)的啟動子的關(guān)鍵序列;(6)應(yīng)用電泳遷移率改變實驗(Electrophoresis Mobility Shift Assay,EMSA)尋找與-30位CpG位點附近序列結(jié)合的核蛋白.在對MAGE-A1基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制的研究中,我們發(fā)現(xiàn):1.在所檢測的4株肝癌細胞株中,MAGE-A1啟動子的去甲基化狀態(tài)與該基因在細胞中的表達相關(guān),且該基因的轉(zhuǎn)錄受到DNA甲基化的調(diào)控;2.MAGE-A1啟動子的-81和-30位CpG位

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