苦參堿誘導(dǎo)膽囊癌細(xì)胞GBC-SD周期阻滯及凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、膽囊癌是最常見的膽道系統(tǒng)惡性腫瘤，占消化系統(tǒng)惡性腫瘤的第五位。膽囊癌惡性程度很高，5年存活率低于5％。腫瘤高度惡性的生物學(xué)行為及早期診斷困難是膽囊癌患者預(yù)后不佳的主要因素。膽囊癌放射性治療效果不顯著，手術(shù)難以達(dá)到根治性切除。因此，進(jìn)一步研究新的有效的治療方法是必要的，比如新的化療藥，介入治療和基因治療?？鄥⑹莻鹘y(tǒng)中藥，含多種生物堿，已廣泛應(yīng)用于臨床。其有效成分具有抗寄生蟲、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗肝損傷等藥理作用，并有一定的調(diào)節(jié)免疫作用

2、?？鄥A是其有效活性成分之一，其分子式C15H24N20?，F(xiàn)在的研究發(fā)現(xiàn)，苦參堿能夠抑制腫瘤細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，其作用已經(jīng)在官頸癌、淋巴瘤、胃癌、肝癌、乳腺癌及肺癌中證實(shí)，盡管如此，目前尚無研究探討苦參堿抗膽囊癌細(xì)胞的作用及機(jī)制。本研究以不同濃度苦參堿及兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)位作用于人膽囊癌細(xì)胞株GBC-SD，觀察不同濃度及不同時(shí)間點(diǎn)苦參堿對(duì)GBC-SD細(xì)胞增殖、凋亡影響及機(jī)制。
　　 目的：苦參堿(Matrine，Mat.)是從豆

3、科植物苦參(Sophora flavescens Ait.)，苦豆子(s.alopecuroides L)，廣豆根(s.subprostrata Chun et T.Chen)等中分離出來的生物堿，是白金雀兒堿(lupanine)的異構(gòu)體，屬于四環(huán)的喹諾里西啶類(quinolizidine)，分子式為C15H24N20。本實(shí)驗(yàn)的目的是研究苦參堿對(duì)人膽囊癌細(xì)胞的增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用，并探討其機(jī)制。
　　 方法：不同濃度的苦參堿(

4、0.125，0.25，0.5mg/mL)作用于人膽囊癌GBC-SD細(xì)胞24，48小時(shí)。細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)(MTT方法)觀察不同濃度苦參堿對(duì)膽囊癌細(xì)胞增殖抑制的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期及凋亡；蛋白免疫印跡法(Western Blotting)檢測不同藥物處理后一些周期及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平的變化，包括Cdk2，Cdk4，Cdk6，CyclinE，CyclinD1，bax，bc1-2，caspase-3。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSS13.0軟件完

5、成，計(jì)量資料數(shù)據(jù)表示方式以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)，兩組計(jì)量資料采用非獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，各組指標(biāo)間的相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性意義。
　　 結(jié)果：膽囊癌GBC-SD細(xì)胞經(jīng)過苦參堿(0.125，0.25，0.5mg/mL)處理24，48h后，細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)(MTT)證實(shí)苦參堿能夠抑制GBC-SD細(xì)胞的增殖，并且其抑制作用呈現(xiàn)劑量、時(shí)間依賴效應(yīng)。利用流式細(xì)胞儀分析藥物作用后的GB

6、C-SD細(xì)胞，檢測到G1期阻滯和凋亡。Western Blot結(jié)果顯示苦參堿可以明顯降低cyclinE、bc1-2的表達(dá)，以及檢測到bax的表達(dá)上調(diào)，caspase-3的激活。
　　 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)以人膽囊癌細(xì)胞系GBC-SD為對(duì)象，研究苦參堿對(duì)膽囊癌細(xì)胞的增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用。研究表明苦參堿可以明顯抑制膽囊癌細(xì)胞的增殖，導(dǎo)致細(xì)胞G1期阻滯，其周期阻滯可能與苦參堿下調(diào)cyclinE的表達(dá)有關(guān)。同時(shí)苦參堿可能通過下調(diào)bc1-2，上