結(jié)締組織行長(zhǎng)因子、核轉(zhuǎn)錄因子在糖尿病大鼠肺中的表達(dá)及苦參堿的干預(yù)作用.pdf

1、肺間質(zhì)纖維化(pulmonary interstitial fibrosis,PF)是一種原因不明、發(fā)病機(jī)制不清、缺乏治療手段的致命性彌漫性肺間質(zhì)病。近年來(lái),越來(lái)越多的文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor,CTGF)與多種組織器官纖維化有密切的關(guān)系。由于病因復(fù)雜,發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,臨床治療效果不理想。近年來(lái)隨著對(duì)中醫(yī)中藥研究的深入,國(guó)內(nèi)研究證實(shí)苦參堿(Matrine)在抗肝臟、腎臟

2、纖維化中有一定的療效,但有關(guān)其對(duì)肺纖維化的作用,目前仍未見報(bào)道。
　　 多種因素產(chǎn)生的肺損害均可導(dǎo)致肺纖維化的發(fā)生。近年來(lái),糖尿病(diabetes mellitus,DM)對(duì)肺的影響逐漸引起了大家的重視,已證實(shí)肺組織是DM損害的重要靶器官。有研究認(rèn)為肺部病變可能與高血糖引起的非酶糖基化反應(yīng)和糖基化終產(chǎn)物積累有關(guān),肺賴氨酸氧化酶活性升高,氧化應(yīng)激可能也是DM肺部病變的重要發(fā)病機(jī)制。DM是一種炎癥反應(yīng),作為細(xì)胞內(nèi)炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的

3、調(diào)控中心的核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)也在肺部病變中起重要作用。但DM能否導(dǎo)致肺纖維化目前國(guó)內(nèi)外鮮有報(bào)道。
　　 目的：
　　 觀察DM肺的病理改變,研究CTGF、NF-κB的表達(dá)情況,探討肺部病變可能的作用機(jī)制,并為臨床藥物治療找尋新的靶點(diǎn)。
　　 方法：
　　 雄性SD大鼠,隨機(jī)分為3組:1.對(duì)照組;2.模型組;3.苦參堿組。通過(guò)腹腔注

4、射鏈脲佐菌素(STZ55mg/kg腹腔注射1次)建立DM模型,苦參堿組在此后每天腹腔注射苦參堿(Matr.15mg/kg)5周。對(duì)照組注射相應(yīng)劑量0.9％生理鹽水。分別在4周和6周處死大鼠,觀察肺系數(shù)比,檢測(cè)羥脯氨酸(HYP),進(jìn)行CTGF、NF-κB檢測(cè),并觀察光學(xué)顯微鏡下肺損傷的程度。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)實(shí)時(shí)定量RT-PCR測(cè)定各組中CTGF的含量,并用WesternBlot檢測(cè)NF-κB的蛋白表達(dá)水平,觀察各自在DM肺中的表達(dá)情況及其與肺纖

5、維化的關(guān)系,探討其可能的發(fā)病機(jī)制。
　　 結(jié)果：
　　 1.DM大鼠肺出現(xiàn)纖維化改變:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)腹腔注射鏈脲佐菌素誘導(dǎo)大鼠形成DM,以隨機(jī)血糖＞16.7mmol/L,尿糖強(qiáng)陽(yáng)性作為DM動(dòng)物模型建立標(biāo)準(zhǔn)。在實(shí)驗(yàn)4周和6周時(shí)DM大鼠肺在顯微鏡下出現(xiàn)肺泡炎、肺纖維化樣改變,肺組織中HYP含量上升,并隨著病程逐漸增加。6周時(shí)肺系數(shù)增加,模型組的肺系數(shù)(1.369±0.204)與對(duì)照組(0.851±0.201)比較明顯升高(P＜0

6、.05),HYP含量增加,與對(duì)照組比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,顯微鏡下肺纖維化樣改變明顯。以上均為肺纖維化的基本特征,提示DM導(dǎo)致肺纖維化。
　　 2.模型組CTGF、NF-κB表達(dá)增加:實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)DM模型中CTGFmRNA的量逐漸上升,比正常對(duì)照組上升了約5.6倍(4周,P＜0.01)和6.1倍(6周,P＜0.01)。Western-Blot檢測(cè)顯示,在正常肺組織中有低水平的NF-κB/p65表達(dá),誘導(dǎo)大鼠形成DM

7、4N時(shí)肺組織中NF-κB/p65表達(dá)明顯增高,達(dá)到正常對(duì)照組的4.4倍(P＜0.01),6周時(shí)為4.2倍(P＜0.01).
　　 3.苦參堿能抑制DM大鼠肺中CTGF、NF-κB/p651的表達(dá):6周時(shí)苦參堿組肺系數(shù)(0.960±0.314)較模型下降(P＜0.05),HYP含量較模型組下降(P＜0.05),顯微鏡下觀察肺泡炎、肺纖維化樣程度較模型組減輕(P＜0.05,P＜0.01)。實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)4N時(shí)苦參堿組C

8、TGFmRNA的量上升,為正常對(duì)照組的約2.9倍(P＜0.05),比DM模型下降了22.6％(P＜0.05),6周時(shí)為正常對(duì)照組的2.1倍(P＜0.05),比DM模型組下降了55.9％(P＜0.01)。Western-Blot檢測(cè)顯示,4周時(shí)苦參堿組NF-κB/p65的量上升,比正常對(duì)照組上升約為2.6倍(P＜0.05),比DM模型下降了42.5％(P＜0.01),6周時(shí)比正常對(duì)照組上升約為2.2倍(P＜0.05),比DM模型下降了46