對蝦白斑綜合癥病毒膜蛋白VP32和類膠原蛋白CLP的初步鑒定.pdf

1、對蝦白斑綜合癥病毒(white spot syndrome virus，WSSV)是一種具有囊膜、無包涵體的桿狀型雙鏈環(huán)狀DNA病毒，Nimaviridae屬Whispovirus種中唯一的物種，也是嚴(yán)重危害對蝦養(yǎng)殖業(yè)的最主要病原。 目前我們的研究主要圍繞WSSV的蛋白功能開展研究。這是因?yàn)椴《镜鞍讌⑴c病毒的形態(tài)構(gòu)成、對宿主細(xì)胞的入侵、增殖等一系列活動，并在其中扮演了重要角色。 本論文研究分為以下兩個(gè)部分： (1

2、)質(zhì)譜發(fā)現(xiàn)病毒膜蛋白VP32是ORF WSV198的編碼產(chǎn)物。我們構(gòu)建了融合表達(dá)載體pGEX-2Th-vp32和pMAL-vp32并分別在E.coli BL-21菌株中表達(dá)純化了GST-VP32和MBP-VP32，制備了相應(yīng)的抗血清。通過western-blot分析進(jìn)一步證實(shí)了VP32屬于病毒膜蛋白。免疫金標(biāo)定位顯示其分布在病毒囊膜上，使用去污劑0.1％Tween-20輕微處理囊膜后，金標(biāo)定位顯示其似乎位于囊膜內(nèi)側(cè)。進(jìn)一步對其蛋白質(zhì)功能

3、的研究(主要是蛋白質(zhì)相互作用方面)遇到了阻力，推測是耦聯(lián)的GST/MBP影響了VP32的正確折疊，無法形成天然空間構(gòu)象。 (2)WSSV ORF WSV001編碼產(chǎn)物類膠原蛋白(collagen-like protein， CLP)是WSSV病毒中一個(gè)非常獨(dú)特的蛋白，由1684個(gè)氨基酸組成，預(yù)測分子量為168.2 KDa。經(jīng)研究分析，該蛋白含有一段特異的類膠原蛋白序列(Gly-X-Y.161-1327 aa)，在病毒中發(fā)現(xiàn)該序列