對蝦白斑綜合癥病毒受體阻斷劑的初步篩選.pdf

1、對蝦白斑綜合癥病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)自92年以來養(yǎng)殖一類宿主廣且毒力強的對蝦病原,給海水養(yǎng)殖業(yè)帶巨大的經(jīng)濟損失.十幾年來,各研究者從其組織病理學(xué)、免疫學(xué)、基因組學(xué)及蛋白質(zhì)組學(xué)等深入分子生物學(xué)水平的研究,對該病原有了很深了解.然而有關(guān)其抗病毒藥物的研究至今未見有報道.該論文建立了96孔板上建立了對蝦鰓膜受體蛋白和WSSV的特異結(jié)合模型,研究了二者結(jié)合的量比關(guān)系,及包被蛋白的最適量;還研究了Tx

2、itionX-100、SDS及NP40等表面活性劑對結(jié)合活性的影響,發(fā)現(xiàn)TxitionX-100和NP40可提高結(jié)合活性,而SDS則會使結(jié)合活性降低.通過該研究,改進了96孔板上病毒和鰓膜受體蛋白特異結(jié)合的技術(shù).研究了一些多糖對WSSV受體的阻斷作用,篩選得到的三種多糖對WSSV的受體結(jié)合有很強的抑制作用.包被對蝦鰓膜受體蛋白,使受體結(jié)合與固相載體上,然后加入多糖H處理過的地高辛標記的WSSV,實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),多糖H處理過的WSSV結(jié)合活

3、性有很明顯的降低;把WSSV包被于固相載體上,加入分別用多糖A及多糖P處理過的地高辛標記的對蝦鰓膜受體蛋白,結(jié)果顯示,二者對鰓膜受體蛋白結(jié)合活性也有很明顯的抑制作用.進行了多糖H對健康蝦的抑制感染研究,結(jié)果表明多糖H對WSSV的感染有一定程度的抑制作用.揭示了多糖抗WSSV感染的可行性.通過畢赤酵母表達系統(tǒng)成功表達了WSSV的兩個粘附蛋白VP281及VP292,96孔板上分析其結(jié)合活性,結(jié)果顯示VP281有很強的結(jié)合活性,提示了酵母表達