姜黃素納米粒防治糖尿病視網(wǎng)膜病變研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文姜黃素納米粒防治糖尿病視網(wǎng)膜病變研究姓名：鄭海生申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：藍育青20100520中山大學(xué)碩士學(xué)位論文姜黃素納米粒防治糖尿病視網(wǎng)膜病變研究染料FITC的ChitDC及Cur／ChitDC與hRPE細胞的相互作用：負載熒光染料FITC的ChitDC及Cur／Chit—DC作用于hRPE細胞24h后，倒置熒光顯微鏡下觀察避光培養(yǎng)1、3、5天后ChitDC及Cur／ChitDC與hRPE細胞的相

2、互關(guān)系。4CCK8LL色法評價ChitDC對hRPE細胞的增殖影響：CCK8法檢測不同劑量(5、10、20、40“rdml)ChitDC在不同時間點(24h、48h)對hRPE細胞的增殖影響，評價Chit—DC的生物安全性。5CCK8法檢測不同劑量(5、10、20、40pg／r111)Cur／ChitDC和Cur在不同時間點(1、2、3、4、5、6d)對hRPE細胞的增殖影響。6流式細胞儀測定Cur／chit—DC及Cur對hRPE細胞

3、周期時相變化。7半定量RTPCR分別檢測劑量為10pg／ml的Cur、ChitDC和Cur／Chit—DC作用hRPE細胞24h后細胞VEGFmRNA的表達水平。結(jié)果：1通過將Cur與ChitDC混合制成負載藥的殼聚糖衍生物納米粒為淡黃色；藥物從納米粒中的釋放在96h后達到平衡，累積釋放藥物量為316％。2體外成功培養(yǎng)hRPE細胞，胞體為不規(guī)則多角形，胞內(nèi)含黑色素顆粒，中央有一圓形透明區(qū)為細胞核；隨著傳代次數(shù)的增加，胞漿內(nèi)的黑色素顆粒逐

4、漸減少，當傳至第56代時胞漿內(nèi)的黑色素顆粒基本消失，形狀類似成纖維細胞。經(jīng)免疫化學(xué)角蛋白單克隆抗體鑒定呈陽性。3不同濃度的Chit—DC納米粒作用于hRPE細胞24h、48h后與對照組(藥物濃度為0mg／L)OD值的差別無統(tǒng)計學(xué)意義(PO05)。提示載藥材料ChitDC對hRPE細胞無毒性、安全性良好。4負載熒光染料FITC的ChitDC與hRPE細胞作用1天后，ChitDC納米粒大部分仍位于近細胞膜的部位(可能在細胞膜表面，也可能在細

5、胞質(zhì)中)；第3天，納米粒逐漸向細胞核會聚，且大部分位于細胞核周圍；第5天，可看到ChitDC納米粒已進入細胞核，且納米?？赡茉诩毎麅?nèi)溶酶體的作用下有部分降解，因此，熒光染料擴散到整個細胞中，在熒光圖中可看到細胞的輪廓，且細胞核區(qū)域的熒光較強。即隨著時間的延長，納米粒由細胞外進入細胞內(nèi)并逐漸地降解。Cur／ChitDC和細胞作用的關(guān)系與ChitDC大致相同。5Cur／ChitDC納米粒與Cur原藥對體外培養(yǎng)的hRPE細胞的增生抑制率存在U