兒童急性淋巴細胞白血病糖皮質激素受體研究.pdf

1、目的: 糖皮質激素（GC）是治療兒童急性淋巴細胞性白血?。ˋLL）的主要藥物之一，糖皮質激素受體（GR）介導了GC的作用。部分GC耐藥可能與GR變化密切相關。本課題研究起病時ALL患兒腫瘤細胞胞漿糖皮質激素受體（cGR）水平，對GR2、8、9a外顯子變異高發(fā)位點序列片段測序，結合臨床早期化療反應敏感性分析，以期為臨床應用GC治療兒童ALL以及判斷預后提供實驗學指標的參考和指導。 方法: 應用流式細胞術檢測66例ALL患兒白血病

2、細胞、及31例正常兒童淋巴細胞胞漿糖皮質激素受體(cGR)的表達。PCR擴增58例ALL患兒白血病細胞和30例正常兒童淋巴細胞GR基因組2、8、9a序列片段并測序，結合臨床誘導化療后強的松試驗反應、（第19天、第35天）BM變化進行分析。 結果: 對66例ALL患兒、31例正常兒童cGR檢測，證實（1）ALL患兒起病時cGR表達（原始數(shù)據(jù)對數(shù)轉換后1.59 ± 0.34）和正常兒童間cGR（原始數(shù)據(jù)對數(shù)轉換后1.27 ± 0.

3、17）表達有顯著性差異（P=0.00, <0.05）。（2）為探討ALL兒童起病時cGR水平是否在正常兒童cGR水平95％可信區(qū)間 ( 0.83~1.71 ) 及99％ 可信區(qū)間 ( 0.94~1.60 ) 范圍內(nèi)對早期化療反應的影響，將66例ALL分為正常cGR組和異常cGR組，并對HR和LR病人分別統(tǒng)計,結果發(fā)現(xiàn)異常cGR組第19天M1比率減低, 其中HR病人為71.4％ 和72.7％, LR病人為75％和75％, 均低于正常cGR

4、組病人,其中HR病人為87％ 和93.3％, LR病人為94.1％和100％,但未達到統(tǒng)計學意義。 對58例ALL兒童、30例正常兒童GR外顯子（EXON）2、8、9α和內(nèi)含子H的序列分析，發(fā)現(xiàn) ( 1 ) 在ALL兒童中檢測出DNA（ACCESSION NT 029289） 3942537 ( rs6199 )、3942444（rs13306588）、3824826（rs258750）、 3824726、3824723、38

5、22923等共6處變異。在正常兒童中檢測出DNA3824826（rs258750）1處變異。 ( 2 ) 為探討變異對cGR的影響，比較組間cGR值, 結果顯示變異組log cGR（1.49 ± 0.29）與非變異組log cGR（1.49 ± 0.33）無顯著性差異( P = 0.98 >0.05 )。( 3 ) 為探討變異對化療敏感性的影響, 比較ALL兒童變異組和無變異組間PGR、CR、MRD<0.01％比率, 變異組較無變異組比

6、率高, 前者分別為93.3％、100％、84.6％, 后者分別為88.9％、89.5％、57.6％ 均高于后者,兩組間差異未達到顯著性意義 ( P值分別為1.0、0.31、0.10, 均>0.05)。（4）為探討rs258750SNP與化療反應間的關系，對rs258750SNP G（攜帶等位基因G）組與rs258750SNP A（攜帶等位基因A）組間的PGR、CR、MRD<0.01％比率進行比較，兩組臨床資料沒有顯著性差異,結果發(fā)現(xiàn)rs

7、258750 SNP G組分別為92.3％、100％、90.9％, rs258750SNP A組分別為89.5％、90.2％、57.1％, 兩組間PGR、CR比率差異無顯著性意義 ( P值分別為，均>0.05), 兩組間MRD<0.01％比率有顯著性差異（P=0.04, < 0.05），提示本組ALL兒童rs258750SNP G對預后有益。（5）對46例ALL兒童檢測到的N363S多態(tài)性位點序列進行分析，未發(fā)現(xiàn)有多態(tài)性現(xiàn)象，提示N36

8、3S多態(tài)性在中國兒童中發(fā)生頻率低。 結論: 可采用FCM方法檢測胞漿糖皮質激素受體（cGR）, 正常兒童cGR水平低于ALL兒童起病時cGR水平, ALL兒童起病時cGR水平超出正常范圍者早期化療反應良好比率減低，但未達到統(tǒng)計學意義，有待積累大樣本明確是否有意義。糖皮質激素受體基因內(nèi)含子H中rs258750多態(tài)性和ALL兒童早期化療反應有關，等位基因G攜帶者預后好，機理有待研究。糖皮質激素受體基因N363S多態(tài)性在中國兒童中發(fā)