慢性HCV和-或HBV感染者Th1、Th2主要細胞因子基因多態(tài)性研究.pdf

1、不同個體感染 HCV 和/或HBV后，臨床表現(xiàn)復雜多樣。約15％的感染者可自發(fā)清除病毒而免受疾病侵襲，約85％的感染者會轉(zhuǎn)為慢性，并且在慢轉(zhuǎn)者中約20％可進展為肝硬化，甚至原發(fā)性肝細胞癌。分析原因可能是病毒因素和宿主遺傳因素綜合作用的結(jié)果，但有報道認為即使是相同的病毒分離株在感染不同個體時其臨床表現(xiàn)也有很大差異，因此宿主的遺傳因素在丙型、乙型肝炎慢性化作用中起著重要作用。 據(jù)報道，不同個體對HCV和/或HBV感染所發(fā)生的免疫反應

2、不同，個體間某些細胞因子的基因多態(tài)性可能導致機體免疫功能狀態(tài)的差異，因而決定著HCV/HBV感染的不同臨床轉(zhuǎn)歸。輔助性T細胞(Th)是免疫調(diào)節(jié)的核心細胞，在IFN-γ的作用下，Th0細胞可分化為Th1細胞，Th1主要分泌IL-2、IFN-γ等，通過介導細胞免疫，用于宿主的抗病毒、細胞毒效應、NK細胞自然殺傷作用等；在IL-4作用下，Th0細胞分化為Th2細胞，Th2主要分泌IL-4、IL-10 等，刺激B淋巴細胞分化增殖產(chǎn)生抗體。Th1

3、和Th2細胞因子的功能互相拮抗，Th1和 Th2 細胞功能的失衡將嚴重擾亂體液免疫和細胞免疫，進而影響著HCV、HBV 感染者的慢性化和不同的臨床轉(zhuǎn)歸。 目前，關于慢性HCV和/或HBV感染者體內(nèi)Th1主要細胞因子IFN-γ、IL-2和 Th2主要細胞因子IL-4、IL-10的表達水平報道尚不統(tǒng)一，與表達細胞因子水平相關的基因多態(tài)性研究尚處于起步階段，并且結(jié)果報道各異。 為此，本研究以不同感染類型：慢性HCV重疊HBV感

4、染、單純HCV感染、單純HBV感染和健康對照及不同臨床轉(zhuǎn)歸：輕型、中重型肝炎、肝硬化和健康對照為研究對象，探討IFN-γ+T874A、IL-2-T330G、IL-4-C589T、IL-10-G1082A、IL-10-A592C的基因多態(tài)性與不同感染類型、臨床轉(zhuǎn)歸、病毒復制和肝功異常的關系及各細胞因子基因多態(tài)性對臨床轉(zhuǎn)歸有無交互作用，探討HCV和/或HBV感染者不同臨床轉(zhuǎn)歸的免疫遺傳機制。 第一部分 ELISA聯(lián)合RT—n PCR

5、檢測慢性HCV感染者的結(jié)果分析 目的：對比酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)和逆轉(zhuǎn)錄一套式一聚合酶鏈反應(RT-n PCR)檢測慢性丙型肝炎病毒感染者的抗-HCV和HCV RNA結(jié)果，為臨床檢測和血站篩選健康獻血員提供參考依據(jù)。 方法：2005年5月對河北趙縣某農(nóng)村單采血漿還輸血細胞HCV 感染者133人及健康對照52人共185人采集空腹靜脈血。該感染人群于1990年前單采血漿還輸血細胞時感染、1993年經(jīng)現(xiàn)場調(diào)查、血清生化

6、指標及病原學標志檢查確診為HCV感染者、2002年追蹤調(diào)查仍明確診斷者。用ELISA法檢測抗-HCV，用RT-n PCR檢測HCV RNA。 結(jié)果：①185份血清標本中，抗-HCV和HCY RNA均陽性者92份，占49.73％；抗-HCY陰性、HCY-RNA陽性18份，占9.73％；抗-HCV陽性、HCV-RNA陰性22份，占11.89％，兩者均陰性53份，占28.65％。兩種方法檢測結(jié)果一致符合率為78.38％((92+53)

7、/185)，Kappa=0.548(u=8.65，P<0.01)，另外用配對卡方檢驗兩種方法不一致率亦無差別(x<'2><,paried>=0.40，P>0.05)，均說明兩種檢測方法高度一致；②ELISA法檢測慢性HCV感染者的靈敏度為82.71％，特異度為92.31％，漏診率為17.29％；RT-n PCR 檢測的靈敏度為81.20％，特異度為96.15％，漏診率為18.80％，兩種方法檢測靈敏度無差別(x<'2>=0.10，P>0

8、.05)；③并聯(lián)試驗檢測靈敏度為96.75％，特異度為88.76％，其靈敏度明顯高于單一ELISA法時的82.71％(x<'2>=9.62，P<0.01)，也明顯高于串聯(lián)試驗67.16％的靈敏度(x<'2>=29.39，P=0.00)。 結(jié)論：單獨用ELISA法檢測抗-HCV約有17％的漏檢率，同時用RT-n PCR檢測HCV RNA，可明顯提高HCV 感染者的陽性檢出率。 第二部分慢性HCV和/或HBV感染者Th1主要

9、細胞因子基因多態(tài)性研究 目的：研究Th1主要細胞因子基因IFN-γ+874和IL-2-330 單核苷酸多態(tài)性(SNP)與單純HCV、HBV感染及HCV重疊HBV感染、臨床轉(zhuǎn)歸等的關系，探討HCV/HBV感染者慢性化和臨床轉(zhuǎn)歸的免疫遺傳機制。 方法：用序列特異性引物一聚合酶鏈反應(PCR-SSP)和限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性-聚合酶鏈反應(RFLP-PCR)技術檢測了79例慢性HCV重疊HBV感染、55例單純HCV感染、6

10、9例單純HBV感染和74例健康對照者的IFN-γ+874 SNF和IL-2-330SNP，Beckmaln LX-20 生化分析儀檢測肝功，RT-n PCR檢測HCY RNA。分析了IFN-γ+874和IL-2-330 基因型和等位基因頻率與慢性HBV/HCV感染、臨床轉(zhuǎn)歸、ALT異常和 HCV RNA 表達等的關系。 結(jié)論：Th1主要細胞因子IFN-γ+874和IL-2-330 基因多態(tài)性與HCV/HBV 感染者慢性化及臨床轉(zhuǎn)

11、歸有明顯的統(tǒng)計學關聯(lián)，與病毒復制和肝功損傷無明顯關聯(lián)。IFN-γ+874AA基因型、IL-2-330 TT基因型和 T 等位基因可能是HCV和/或HBV感染及其臨床轉(zhuǎn)歸的危險基因(型)，IFN-γ+874 TA、IL-2-330 GG基因型和T等位基因可能為其保護基因(型)。 第三部分慢性HCV和/或HBV感染者Th2主要細胞因子基因多態(tài)性研 目的：研究Th2主要細胞因子IL-4-589、IL-10-1082和IL-10

12、-592基因多態(tài)性與單純HCV、HBV感染及HCV重疊HBVV感染、臨床轉(zhuǎn)歸等的關系，探討HBV和/或HCV慢性感染者和不同臨床轉(zhuǎn)歸的遺傳易感機制。 方法：用SSP-PCR和RFLP-PCR技術檢測79例HCV重疊HBV感染、55例單純HCV感染、69例單純HBV感染和74例健康對照者的IL-4-589 SNP、IL-10-1082和IL-10-592；用RT-n PCR方法檢測血清HCV RNA；用BeckmanLX-20全自

13、動生化分析儀檢測肝功能。 結(jié)論：Th2主要細胞因子IL-10-1082基因型與HCV和/或HBV 感染類型、不同臨床轉(zhuǎn)歸、病毒復制有明顯的統(tǒng)計學關聯(lián)，從基因型可能是其危險基因型，AG基因型可能是其保護基因型；IL-10-592和IL-4-589位點多態(tài)性與HBV和/或HCV感染者的肝功損傷有一定聯(lián)系，IL-10-592AC基因型、IL-4-589 CT、CC基因型和C等位基因可能是其危險基因(型)，IL-10-592AA基因型、

14、IL-4-589 TT基因型和T等位基因可能是其保護基因(型)。 第四部分 Th1、Th2細胞因子基因多態(tài)性在慢性HCV和/或ItBV感染者臨床轉(zhuǎn)歸中的交互作用研究 目的：探討Th1、Th2細胞因子基因多態(tài)性在慢性HCV和/或HBV感染者臨床轉(zhuǎn)歸中的交互作用。 方法：用多因子降維法(MDR)分析Th1、Th2細胞因子基因多態(tài)性在慢性HCV和/或HBV感染者及臨床轉(zhuǎn)歸中有無交互作用，患病風險用OR及95％CI評價，

15、交互作用大小用交互作用指數(shù)(S)、交互作用歸因比(API)、交互作用超額相對危險度(RERI)及95％可信限(95％CI)評價。 結(jié)論：Th1主要細胞因子IFN-γ+874 AA、IL-2-330 TT 基因型對慢性HCV/HBV感染者不良臨床轉(zhuǎn)歸有明顯的協(xié)同作用；Th2 主要細胞因子IL-4-589 CC或CT和IL-10-592 AC基因型對慢性HCV/HBV 感染者肝臟炎癥性損傷有明顯的協(xié)同作用；Th1主要細胞因子基因型I