不同HBV感染者外周血中Th17細胞、IL-21及其它細胞因子的分析.pdf

1、乙型肝炎病毒（HBV）慢性感染嚴重威脅著人類的健康，HBV慢性感染的發(fā)病機理仍未闡明，嚴重阻礙了有效治療措施的研發(fā)。一般認為HBV對肝細胞無直接致病性，導致肝臟損傷的機制主要是由機體的免疫系統(tǒng)介導的，并依賴于病毒的不斷復制。近年研究表明,T細胞亞群介導的細胞免疫以及細胞因子網絡的調控在乙型病毒性肝炎肝細胞免疫病理損害中起著重要的作用。目前，CD4+T細胞可以分為Th1、Th2、Treg、Th17、Tfh、Th9、Th22等細胞亞群，可以

2、分泌IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-4、IL-10、IL-17、IL-21、IL-22等眾多的重要的細胞因子。研究表明，CD4+T細胞分泌的白細胞介素-21對維持CD8+T細胞的功能發(fā)揮重要作用。IL-21可增強慢性病毒感染過程中CD8+T細胞應答，在CD4+T細胞輔助CD8+T細胞控制感染慢性化中發(fā)揮重要作用。本研究主要完成了以下工作：
　　1不同HBV感染者外周血PBMC中IL-21及Th17細胞的表達及其相互關系的研

3、究及意義
　　為了觀察不同HBV感染者外周血中Th17細胞和IL-21的表達情況、相互關系以及其與臨床指標的相關性，我們采用密度梯度離心法分離76例不同臨床表現的HBV感染者和13例健康對照者的外周血單個核細胞(PBMC)，流式細胞術檢測CD3+CD4+IL-17A+T細胞亞群（即Th17細胞）、CD3+CD4+IL-21+T細胞及CD3+CD4+IL-17A+IL-21+T細胞的表達情況。
　　結果：
　　1)在無P

4、MA和ionomycin刺激的陰性對照中，產生IL-21和IL-17的CD4+T細胞很少,約為0.15％和0.08％；PMA+ionomycin刺激可以誘導CD4+T細胞產生IL-21和IL-17。
　　2)樣本中幾乎檢測不到IL-21+IL-17A+CD4+T細胞。
　　3)IL-21+CD4+T細胞比例在急性乙肝組(1.58±1.10％)、乙肝病毒攜帶組(1.80±1.33％)中較正常對照組(0.82±0.70％)和慢重

5、肝組(0.76±0.52％)顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義，P<0.05；在慢性乙肝組（1.05±0.74％）和非活動性HBsAg攜帶組（1.13±0.65％）較正常對照組和慢重肝組也有所升高，但是差異無統(tǒng)計學意義。
　　4)Th17細胞亞群比例在各組間未見統(tǒng)計學差異。
　　5)除急性乙型肝炎組（r=0.178,P=0.60）外，IL-21+CD4+T細胞比例與Th17細胞亞群比例在正常對照組（r=0.787,P=0.001）、

6、乙肝病毒攜帶組（r=0.783,P=0.007）、慢性乙型肝炎組（r=0.699,P=0.001）、非活動性HBsAg攜帶組（r=0.657,P=0.002）、慢性乙型重型肝炎組（r=0.724,P=0.005）組中均有較好的相關性。
　　6)實驗檢測指標與臨床各項指標相關性分析均無統(tǒng)計學意義。
　　2不同HBV感染者外周血血漿中IL-21、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8（CXCL8）、IL-10、IL-17、IFN

7、-γ、TNF-α濃度的檢測
　　為了檢測血漿中IL-21濃度及初步了解Th1、Th2、Treg、Tfh等細胞亞群與HBV感染后不同臨床表現的關系，我們收集了122例不同HBV感染者和15例健康對照者新鮮血漿，采用ELISA法檢測IL-21的濃度和多路微球細胞因子免疫檢測（MultiplexedMicrosphereCytokineImmunoassay）方法檢測IL-2、IL-4、IL-6、IL-8（CXCL8）、IL-10、IL

8、-17、IFN-γ、TNF-α的濃度，單位均為pg/ml。
　　結果：
　　1)血漿中幾乎檢測不到IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、IFN-γ、TNF-α。
　　2)血漿中IL-21、IL-2的濃度在各組見未見統(tǒng)計學差異。
　　3)趨化因子IL-8（CXCL8）在慢重肝組（60.01±88.10）較正常對照組（7.13±2.49）、急性乙肝組（5.21±1.95）、乙肝病毒攜帶組（3.62±2.27）、