香葉木素取代物調(diào)控靜脈血栓蛋白質(zhì)組及靶蛋白的探索.pdf

1、蓬子菜是中國(guó)東北的一種野生植物，這種植物以它是維生素的優(yōu)良的食物來(lái)源而著稱，它還包含綠原酸，水楊酸和黃酮類等物質(zhì)。報(bào)道蓬子菜的抗靜脈血栓活性值比其它植物特別是黃酮豐富的植物要高，通過(guò)高效液相色譜法（反相液相色譜）從蓬子菜中分離得到的香葉木素取代物已被鑒定為抗血栓的藥效物質(zhì)。本研究通過(guò)分析蓬子菜中香葉木素取代物作用于靜脈血栓的血漿蛋白質(zhì)組的變化，以期尋找香葉木素取代物作用于靜脈血栓的生物標(biāo)記和靶蛋白，為將其作為先導(dǎo)化合物提供理論依據(jù)。

2、r>　　實(shí)驗(yàn)選取Wistar大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組，模型組和預(yù)防組三個(gè)組，其中對(duì)照組不進(jìn)行任何處理，模型組只建立了體外靜脈血栓模型而預(yù)防組是腹腔注射香葉木素取代物后，然后建立體外靜脈血栓模型，采用病理學(xué)檢查進(jìn)行驗(yàn)證，對(duì)亞洲人常見的蛋白c進(jìn)行了分析，結(jié)果表明在血栓形成過(guò)程中，蛋白c起到了滅活活化的凝血因子，促進(jìn)纖維蛋白溶解，減輕內(nèi)皮細(xì)胞的損傷的作用，這與電鏡分析的結(jié)果一致，驗(yàn)證了血栓動(dòng)物模型建立成功。采用雙向電泳與高效液相色譜法相結(jié)合的方法進(jìn)

3、行蛋白質(zhì)組分析，血漿蛋白通過(guò)高速離心分離提取，采用Sephadex柱層析和低豐度蛋白富集試劑盒進(jìn)行分離，以去除免疫球蛋白等的高豐度蛋白質(zhì)。對(duì)低豐度蛋白質(zhì)進(jìn)行雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳，用PDquest軟件進(jìn)行圖像分析，尋找差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。
　　分別對(duì)空白組，模型組和預(yù)防組的2-DE圖像進(jìn)行比較和分析，模型組中一共有147個(gè)蛋白點(diǎn)，預(yù)防中一共有99個(gè)蛋白點(diǎn)；和模型組比較，預(yù)防組共有49個(gè)差異蛋白點(diǎn)表達(dá)，其中表達(dá)上調(diào)2倍的蛋白點(diǎn)有28個(gè)

4、，表達(dá)下降2倍的蛋白點(diǎn)有21個(gè)；在模型組中差異表達(dá)的有56個(gè)蛋白點(diǎn)，在預(yù)防組中差異表達(dá)的有有8個(gè)蛋白點(diǎn)。經(jīng)過(guò)基質(zhì)輔助激光解析飛行時(shí)間質(zhì)譜分析后，成功鑒定了13個(gè)靶蛋白(10個(gè)已知蛋白，3個(gè)未知蛋白)，其中匹配率較高的靶蛋白是 Full=Serum albumin； Flags： Precursor，serum albumin precursor，glutathione S-transferase pi，albumin isoform C