冬蟲夏草蛋白質(zhì)組的初步研究.pdf

1、冬蟲夏草[Cordycepssinensis(Berk)Sacc.]，又名蟲草、冬蟲草、夏草冬蟲，是麥角菌科(Clavicipitaceae)蟲草屬(Cordyceps)的一種蟲生真菌(中國(guó)被毛孢為其無(wú)性階段)。冬蟲夏草具有補(bǔ)腎、免疫調(diào)節(jié)等多種藥理作用，長(zhǎng)期以來(lái)一直被視為珍貴的中藥和藏藥，享譽(yù)全世界，特別在東南亞地區(qū)影響廣泛。 蟲草需要在我國(guó)西部地區(qū)(西藏、青海、甘肅、新疆)特殊的生態(tài)環(huán)境下才能生長(zhǎng)。因此，天然蟲草資源極為短缺，

2、每公斤售價(jià)高達(dá)3萬(wàn)元以上。雖然蟲草菌絲早已實(shí)現(xiàn)人工培養(yǎng)，并可獲得發(fā)酵產(chǎn)物，但其售價(jià)遠(yuǎn)不如天然蟲草(售價(jià)只有幾十元/公斤)。盡管蝙蝠蛾幼蟲和蟲草菌絲的人工培養(yǎng)均已獲得成功，并實(shí)現(xiàn)了在人工條件下誘導(dǎo)中國(guó)被毛孢與蝙蝠蛾幼蟲寄生形成完全相同的的天然蟲草體。但蟲草的這些藥用價(jià)值的具體機(jī)理大多數(shù)都還未進(jìn)行過(guò)深入研究。因此也就還無(wú)法判斷菌絲體是否不需要經(jīng)過(guò)對(duì)蝙蝠蛾幼蟲的特異性寄生就能具有和天然蟲草完全相同的藥理功能。 本研究首先對(duì)中國(guó)被毛孢的

3、液體培養(yǎng)條件進(jìn)行摸索，確定菌絲體大量生長(zhǎng)的較適培養(yǎng)基。然后利用蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)研究技術(shù)手段，對(duì)天然蟲草和蟲草菌的蛋白質(zhì)表達(dá)圖譜進(jìn)行系統(tǒng)研究，對(duì)其整體蛋白質(zhì)組分進(jìn)行分離、比較和鑒定，建立蟲草蛋白質(zhì)凝膠指紋圖譜。采用Edman微量測(cè)序技術(shù)，對(duì)用雙向凝膠電泳分離出來(lái)的差異位點(diǎn)蛋白質(zhì)，進(jìn)行氨基酸序列分析；并根據(jù)蟲草蛋白質(zhì)基本數(shù)據(jù)資料(等電點(diǎn)和分子量)，進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)檢索分析。 本研究最終得出了中國(guó)被毛孢的較適培養(yǎng)基為：2％

4、蔗糖、1％蛋白胨、1.5％酵母膏、0.275％葵瓜子油、pH為5.5(加一定量的無(wú)機(jī)鹽)。此培養(yǎng)基可以使中國(guó)被毛孢菌絲體干重達(dá)到5.42g/L。 將天然蟲草和中國(guó)被毛孢的雙向電泳圖譜比較發(fā)現(xiàn)，天然蟲草僅檢出18個(gè)蛋白點(diǎn)，而中國(guó)被毛孢則有188個(gè)蛋白點(diǎn)。這可能是由于中國(guó)被毛孢菌絲體的蛋白質(zhì)是從鮮活的菌絲體提取，而天然蟲草的蛋白質(zhì)是從干固的蟲草提取，其在形成蟲草的過(guò)程中可能造成大量的蛋白質(zhì)損失或被破壞。雖然在天然蟲草雙向電泳圖譜中分

5、離出的蛋白點(diǎn)較少，卻發(fā)現(xiàn)了4個(gè)蟲草菌雙向電泳圖譜不存在的蛋白點(diǎn)。這些差異蛋白質(zhì)很顯然是蟲草菌寄生到蝙蝠蛾幼蟲后才產(chǎn)生的，這可能是蟲草菌在寄生蝙蝠蛾幼蟲過(guò)程中形成的特殊產(chǎn)物，對(duì)其深入分析可能對(duì)揭示二者之間特異性寄生關(guān)系及對(duì)于分析天然蟲草的特殊藥理作用具有重要意義。此外對(duì)天然蟲草與中國(guó)被毛孢的雙向電泳圖譜進(jìn)行分區(qū)分析。結(jié)果表明中國(guó)被毛孢的蛋白大部分集中在14.4-43.3kD、pH5-7的區(qū)域內(nèi)；天然蟲草蛋白集中在分子量14.4-43kD、