替米沙坦對同型半胱氨酸誘導(dǎo)的人內(nèi)皮細(xì)胞血管細(xì)胞黏附因子-1的影響及與PPAR-δ的關(guān)系研究.pdf

1、目的：
　　觀察替米沙坦對同型半胱氨酸誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞血管細(xì)胞黏附分子-1及與單核細(xì)胞黏附作用的影響，并探討其在抗炎效應(yīng)中與過氧化物酶增殖物活化受體-δ的關(guān)系。
　　方法：
　　第一部分：1、膠原酶消化法獲得人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。2、光學(xué)顯微鏡形態(tài)觀察法及免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)鑒定人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。
　　第二部分：1、RT-PCR法測VCAM-1mRMA的表達(dá)；2、WESTERN BLOTTING法測PP

2、AR-δ蛋白的表達(dá)；3、ROSE BENGAL染色法檢測單核細(xì)胞－血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附水平。
　　結(jié)果：
　?。?）倒置相差顯微鏡下可見培養(yǎng)的細(xì)胞呈卵圓型或多角形，典型的鋪路石樣排列。經(jīng)兔抗人Ⅷ因子相關(guān)抗原多克隆抗體鑒定，細(xì)胞內(nèi)特別細(xì)胞質(zhì)被激發(fā)出紅色熒光。
　?。?）與空白對照組相比，同型半胱氨酸（10-6-10-3mol/l組）呈濃度依賴性地增強(qiáng)了人內(nèi)皮細(xì)胞的血管細(xì)胞黏附分子-1mRNA的表達(dá)水平（P＜0.01）。

3、>　　（3）與HCY組比較，替米沙坦（10-1000nmol/l組）呈濃度依賴性地顯著降低了同型半胱氨酸誘導(dǎo)人內(nèi)皮細(xì)胞的血管細(xì)胞黏附分子-1mRNA表達(dá)水平（P＜0.01）。
　?。?）與空白對照組相比，替米沙坦（1-1000nmol/l組）呈濃度依賴性地增強(qiáng)了過氧化物酶增殖物活化受體-δmRNA的表達(dá)水平（P＜0.01）。
　?。?）過氧化物酶增殖物活化受體-δ激動劑（GW0742）能夠顯著降低同型半胱氨酸誘導(dǎo)的人內(nèi)皮細(xì)胞

4、血管細(xì)胞黏附分子-1mRNA表達(dá)水平及其與單核細(xì)胞的黏附水平（P＜0.01）。
　?。?）過氧化物酶增殖物活化受體-δ抑制劑GSK0660明顯拮抗了替米沙坦對血管細(xì)胞黏附分子-1mRNA表達(dá)水平的降低作用及其對內(nèi)皮細(xì)胞核單核細(xì)胞黏附水平的抑制作用（P＜0.01）.
　　結(jié)論:
　　1通過膠原酶消化法分離，培養(yǎng)，再經(jīng)過光學(xué)顯微鏡形態(tài)觀察法及免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)鑒定法確定獲得了高純度的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，且細(xì)胞存活率較高。<