同型半胱氨酸誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞炎癥損傷及金雀異黃酮的保護(hù)作用機(jī)制探討.pdf

1、目的：探討金雀異黃酮（Genistein，GEN)對(duì)同型半胱氨酸（Homocysteine， HCY)誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV-304毒性和炎癥的抑制作用及其分子機(jī)制。
　　方法：采用 MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA)檢測(cè)相關(guān)炎癥因子白細(xì)胞介素6（IL-6)和細(xì)胞間黏附分子1（ICAM-1)水平，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)胞漿活性氧（ROS）水平，western blot和細(xì)胞免疫組化法檢測(cè)

2、細(xì)胞核蛋白NF-κB p65表達(dá)情況。
　　結(jié)果：①單獨(dú)加5.0 mmol/ L的HCY組細(xì)胞活力最差，為（41.27±5.09）％，與對(duì)照組（100.00±4.54）%比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。而在用不同濃度的GEN（10、50、100μmol/L）孵育12h后，再加入5.0 mmol/L的HCY，各組細(xì)胞活力均有不同程度的升高。尤其是GEN高劑量組（94.25±2.31）%最明顯，與單獨(dú)加HCY組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

3、意義（P<0.05），而與對(duì)照組相比已沒(méi)有明顯差異（P>0.05）。②顯微鏡下見(jiàn)對(duì)照組細(xì)胞光滑飽滿，呈單層鵝卵石樣緊密排列，細(xì)胞狀態(tài)良好。而HCY5.0mmol/L組細(xì)胞收縮變圓，間隙變寬，排列雜亂，聚集成團(tuán)，脫落細(xì)胞大大增加，狀態(tài)也最差。隨著GEN濃度的增高，細(xì)胞狀態(tài)逐漸好轉(zhuǎn)，以100μmol/L的GEN組最好，細(xì)胞飽滿，大小均勻，幾乎無(wú)可見(jiàn)脫落現(xiàn)象。③ELISA結(jié)果發(fā)現(xiàn)，5.0 mmol/L的HCY作用于細(xì)胞0、6、12、24h后，

4、 IL-6及ICAM-1水平均在不斷增高，且均于12h達(dá)峰值，此后逐漸下降。各組值與0h相比均有顯著差異（P<0.01)。④5.0 mmol/L的HCY作用于細(xì)胞12h時(shí)，IL-6及ICAM-1的濃度分別為（2.66±0.28）μg/L、（4.38±0.31）μg/L，對(duì)照組兩者表達(dá)量分別為（2.18±0.04）μg/L、（3.24±0.32）μg/L，5.0 mmol/L的HCY組兩個(gè)因子水平與對(duì)照組相比明顯增高（P<0.05）。然而

5、當(dāng)HCY與不同濃度的GEN聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，各組 IL-6及 ICAM-1水平均有不同程度的下降，尤其是100μmol/L的GEN組下降最明顯，其值分別為（2.17±0.21）μg/L，（3.38±0.27）μg/L，與單獨(dú)加HCY組相比有顯著差異（P<0.01)。⑤5.0 mmol/L的HCY作用于細(xì)胞后，其 ROS水平與對(duì)照組相比明顯升高（P<0.01)；不同濃度的GEN與5.0 mmol/L的HCY聯(lián)合應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)各組ROS水平均有不同程

6、度的降低，其中以GEN高劑量組最顯著（P<0.01)⑥western blot結(jié)果顯示，對(duì)照組細(xì)胞核P65蛋白相對(duì)表達(dá)量較低，為（6.39±0.85）%，而單獨(dú)加5.0 mmol/L的HCY組為（62.24±14.29）%，與對(duì)照組相比明顯增高（P<0.01)。不同濃度的GEN聯(lián)合HCY作用于細(xì)胞后，各組P65相對(duì)表達(dá)量均有不同程度的下降，以GEN高劑量組（5.61±0.97）%最顯著，與單獨(dú)加HCY組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.

7、01)。免疫組織化學(xué)法檢測(cè)P65也顯示相似的結(jié)果。
　　結(jié)論：①5.0 mmol/ L的HCY可使ECV-304細(xì)胞嚴(yán)重受損，活力下降， IL-6及ICAM-1水平增高，而 GEN能顯著抑制由HCY誘導(dǎo)的細(xì)胞活力下降以及IL-6及ICAM-1表達(dá)的增高，很大程度上改善細(xì)胞狀態(tài)。②5.0 mmol/L的HCY可使胞漿的ROS明顯增高，而GEN可抑制ROS的增高趨勢(shì)。③5.0 mmol/L的HCY可使內(nèi)皮細(xì)胞核 NF-κB P65表達(dá)