胰島素對(duì)脫細(xì)胞羊膜復(fù)合脂肪干細(xì)胞對(duì)大鼠全層皮膚創(chuàng)傷的修復(fù).pdf

1、目的:
　　 皮膚是人體面積最大的器官,也是機(jī)體自我更新速度最快的組織之一,它是機(jī)體免于脫水、損傷、感染的第一道防線,是維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和阻止微生物、化學(xué)物質(zhì)等侵入的屏障。盡早覆蓋創(chuàng)面,恢復(fù)皮膚的屏障功能,十分重要。尋找理想的真皮替代物促進(jìn)創(chuàng)傷愈合有重要作用,而真皮替代物中支架和種子細(xì)胞是關(guān)鍵。脂肪干細(xì)胞(adipose-derired stern cells,ADSCs)是具有自我更新、高度增殖和多向分化潛能的細(xì)胞群體,即這些細(xì)

2、胞可通過(guò)分裂維持自身細(xì)胞的特性和大小,又可進(jìn)一步分化為各種組織細(xì)胞,從而在組織修復(fù)等方面發(fā)揮積極作用。脫細(xì)胞羊膜(human acellular anmiotic membrane,HAAM)是一種很好的生物支架材料,它在其它前期臨床的實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出了很好的生物相容性,促近傷口愈合,更重要的是對(duì)各種損傷組織再生有特異的重塑性。小劑量胰島素在創(chuàng)傷愈合過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用,將三者聯(lián)系在一起探討對(duì)非糖尿病和糖尿病大鼠的創(chuàng)傷修復(fù)作用。

3、　　 方法:
　　 1.脫細(xì)胞羊膜制備
　　 取健康剖腹產(chǎn)的人羊膜,生理鹽水沖凈血跡,反復(fù)漂洗。0.5%SDS,37度震蕩過(guò)夜,0.25%胰酶消化24小時(shí),反復(fù)PBS漂洗,冷凍干燥分裝密封,環(huán)氧乙烷消毒,70度冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?br>　　 2.脂肪干細(xì)胞培養(yǎng)
　　 3.脫細(xì)胞羊膜復(fù)合脂肪干細(xì)胞
　　 4.造模取材
　　 取40只大鼠隨機(jī)分為四組,分別在后背部打一直徑2.0cm的全層皮膚創(chuàng)傷的模型

4、。A組為對(duì)照組只加生理鹽水,B組為HAAM加生理鹽水組,C組為HAAM+ADSCs加生理鹽水組,D組為HAAM+ADSCs加胰島素組。分別于7、14、28天取材計(jì)算創(chuàng)面愈合率并行HE染色和VEGF免疫組化染色觀察對(duì)創(chuàng)面的愈合作用。另取50只大鼠,腹腔注射鏈脲佐菌素(streptocozin,STZ)以65mg/kg腹腔注射,3天后測(cè)血糖,如血糖＞16.7mmol/L則糖尿病大鼠模型建立成功,21天后血糖仍維持＞16.7mmol/L后,隨

5、機(jī)選取40只糖尿病大鼠分別于后背部打一直徑為1.8cm的全層皮膚創(chuàng)傷的模型。分組同上。分別于7、14、28天取材,計(jì)算創(chuàng)面愈合率并行HE染色及VEGF免疫組化染色觀察對(duì)創(chuàng)面的愈合作用。
　　 結(jié)果:
　　 兩部分實(shí)驗(yàn)平行進(jìn)行,無(wú)論是否糖尿病大鼠,小劑量胰島素(6U)與脫細(xì)胞羊膜復(fù)合脂肪干細(xì)胞共同作用,均可明顯縮短創(chuàng)面的愈合時(shí)間。于創(chuàng)傷后7、14、28天,觀察發(fā)現(xiàn)A組創(chuàng)面愈合明顯滯后,B組創(chuàng)面愈合率高于A組(P＜0.05)