生長追趕IUGR大鼠脂肪細胞胰島素抵抗機制研究.pdf

1、目的:流行病學資料顯示，宮內(nèi)發(fā)育遲緩兒(intrauterine growth retardation，IUGR)成年后易出現(xiàn)肥胖、胰島素抵抗、高血壓、脂代謝紊亂及2型糖尿病，稱為代謝綜合征。
　　 代謝綜合征的中心環(huán)節(jié)是胰島素抵抗。而IUGR 生后早期追趕生長尤其是脂肪組織的快速追趕生長可能與其發(fā)生胰島素抵抗危險性增加有關(guān)，特別是有基因易感性、肥胖等其他危險因素共存時，此種關(guān)系更明顯。本研究旨在探討4周齡追趕生長IUGR 幼鼠

2、糖脂代謝變化情況及其成熟脂肪細胞葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白-4(glucose transporter 4，GLUT-4)在不同濃度胰島素刺激下的表達和前脂肪細胞增殖能力。并掌握脂肪細胞原代培養(yǎng)及前脂肪細胞傳代分化，為后期脂肪細胞胰島素抵抗分子機制的研究奠定基礎。
　　 方法:采用母孕期饑餓法建立IUGR 新生大鼠模型。受孕鼠隨即分為限食組和正常飲食組，限食組懷孕母鼠孕全程限制飼料(為正常孕鼠食量30[％]飼料，約7.5g/d)，不限制飲水

3、，產(chǎn)后均給予充足食物。每籠每只限食母鼠哺乳5只IUGR 仔鼠作為追趕生長IUGR模型組(catch-up growth IUGR，IUGR-CG)，每籠每只正常飲食母鼠哺乳8只正常仔鼠作為對照組(appropriate for gestational age，AGA)。待喂養(yǎng)至幼鼠3周齡時停止母乳，斷乳幼鼠給予足夠食物直至4周齡。測量出生及生后每周幼鼠身長體重。隨機挑選20只4周齡IUGR-CG 幼鼠和24只4周齡AGA 幼鼠，禁食12

4、h 后采血測甘油三酯、空腹血糖、血胰島素并計算胰島素抵抗指數(shù)。隔日再禁食8h 行糖耐量試驗。隨后斷頭處死幼鼠，無菌條件下取腹股溝或附睪遠端白色脂肪組織，立即行膠原酶消化法原代培養(yǎng)成熟脂肪細胞和前脂肪細胞。共聚焦顯微鏡下觀察免疫熒光染色的成熟脂肪細胞中GLUT-4的表達。結(jié)晶紫法測定前脂肪細胞的增殖能力。用經(jīng)典的“雞尾酒”法誘導前脂肪細胞的分化，并在倒置顯微鏡下觀察脂肪細胞的形態(tài)變化。
　　 結(jié)果:①身長體重變化：追趕生長IUGR

5、(IUGR-CG)組幼鼠在第0～1周體重、身長均顯著低于同齡AGA組(p<0.001)，但第2～4周IUGR-CG組幼鼠體重(33.60±3.80g、59.26±3.02g、74.69±5.81g)分別明顯高于同齡AGA組(29.83±3.01g、50.83±2.14g、71.23±2.75g)。身長在第2周(9.65±0.71cm)追趕上AGA組(9.62±0.25cm)(p>0.05)，3周(13.12±0.26cm)明顯超過AGA

6、組(12.00±0.35cm)(p<0.001)，但4周末(14.43±0.56cm)落后于AGA組(14.76±0.34cm)(p<0.05)。BMI 隨著體重身長的增長速率變化亦發(fā)生變化，出生時(2.16±0.14)顯著低于AGA組(2.54±0.27)(p<0.001)，但4周末IUGR-CG組幼鼠(3.59±0.13)顯著高于AGA組(3.27±0.16)(p<0.001)。
　　 ②糖脂代謝：IUGR-CG組幼鼠空腹血

7、糖維持在正常水平，但空腹血胰島素(7.01±1.43mU/L)、胰島素抵抗指數(shù)(1.32±0.41)和甘油三酯(1.29±0.42 mmol/L)均明顯高于AGA組(5.08±1.35mU/L、0.83±0.20、0.75±0.40 mmol/L)(p<0.05)。葡萄糖耐量試驗中IUGR-CG組幼鼠血糖水平于注射葡萄糖后30min(9.26±0.55mmol/L)、60min(8.34±0.69 mmol/L)、120min(7.08

8、±0.64 mmol/L)、180min(6.91±0.65mmol/L)均顯著高于相同時間點AGA組(7.71±0.61、6.75±0.54、6.28±0.60、5.91±0.37mmol/L)。
　　 ③成熟脂肪細胞GLUT-4表達：IUGR-CG組幼鼠成熟脂肪細胞中GLUT-4在基礎和高濃度、低濃度、生理濃度胰島素刺激下的表達水平與AGA組相比較無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。
　　 ④前脂肪細胞增殖能力：IUGR-

9、CG組幼鼠與AGA組幼鼠的前脂肪細胞生長曲線均近似S型，但培養(yǎng)第6d時IUGR-CG 幼鼠前脂肪細胞增殖能力(0.126±0.005)顯著高于AGA(0.116±0.008)(p<0.05)，培養(yǎng)后期前脂肪細胞增殖能力有超過AGA組趨勢。成功培養(yǎng)了原代脂肪細胞，并掌握了前脂肪細胞的誘導分化。
　　 結(jié)論:追趕生長IUGR 幼鼠生后體重、身長、BMI 發(fā)生明顯的變化。IUGR-CG組幼鼠體重明顯增加，且發(fā)生高甘油三酯血癥、胰島素抵