Exendin-4對誘導大鼠胰腺導管來源干細胞向胰島素分泌細胞定向分化的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 近年來,胰腺干細胞的研究取得了一定進展,目前已成功將胰腺導管和胰島來源的干細胞誘導分化為葡萄糖反應性胰島素分泌細胞。但這些細胞在胰島素的合成和釋放能力以及對葡萄糖刺激的反應能力等方面,均明顯弱于正常的胰島細胞,尚難滿足臨床細胞替代治療的要求。故對胰腺干細胞本質的深入理解、鑒定體系的建立與完善,以及向胰島細胞定向誘導培養(yǎng)方法的不斷改進,將是決定胰腺干細胞應用前景的關鍵。本研究以大鼠胰腺導管來源干細胞(PDSC)為研究

2、對象,在適宜的體外培養(yǎng)條件下從胰腺導管中分離純化干細胞,研究Exendin-4對誘導大鼠胰腺導管來源干細胞(PDSC)向胰島素分泌細胞定向分化的作用。
　　 方法：
　　 對大鼠胰腺導管來源干細胞向胰島素分泌細胞定向分化培養(yǎng)前進行實驗分組,實驗分為四組,對照組:在誘導培養(yǎng)過程中不添加Exendin-4;實驗一組:在誘導培養(yǎng)第一周添加Exendin-4;實驗二組:在誘導培養(yǎng)第二周添加Exendin-4;實驗三組:在誘導培養(yǎng)

3、全程添加Exendin-4。進行誘導培養(yǎng)并光鏡觀察誘導產物,誘導培養(yǎng)后分別在低糖及高糖培養(yǎng)基下孵育,收集上清液,測定胰島素水平。
　　 結果：
　　 經無血清誘導培養(yǎng)2周左右,PDSC可定向分化為胰島樣細胞團(islet-like cellcluster,ICC)。形態(tài)學方面,ICC直徑50～350μm,分化后期脫壁呈懸浮生長。表達特性方面,DTZ染色結果顯示,ICC內含有胰島素陽性細胞,提示ICC在蛋白分子水平表達胰島

4、素。無論在低糖環(huán)境下,還是高糖環(huán)境下,后期添加組(誘導培養(yǎng)第2周添加Exendin-4)的胰島素水平均明顯高于對照組(誘導培養(yǎng)全程不添加Exendin-4)(P＜0.01)和前期添加組(誘導培養(yǎng)第1周添加Exendin-4)(P＜0.01),而與全程添加組(誘導培養(yǎng)全程添加Exendin-4)無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結論：Exendin-4的后期應用促進了PDSC的功能分化,即Exendin-4可促進PDSC的后期