不同化療方案對裸鼠MCF-7乳腺癌移植瘤及VEGF、Bcl-2和PCNA表達的影響.pdf

1、目的：化療作為惡性腫瘤三大常規(guī)治療方法之一，已成為惡性腫瘤治療不可替代的手段。盡管臨床上規(guī)范化治療的實施，但仍無法保證患者個體化化療的有效性，還存在過度化療、盲目化療等不合理的現(xiàn)象。如何真正達到個體化化療在臨床腫瘤治療中顯得尤為重要。腫瘤藥敏試驗對指導臨床個體化化療具有重要的意義。以往腫瘤藥敏試驗對單個藥物的檢測較多，而對聯(lián)合方案的研究較少，如何進一步提高腫瘤藥敏試驗臨床相關性，增加化療療效、減少耐藥性和毒副作用變得越來越重要。而對化療

2、療效的評定除大體WHO通用評價方法之外，還有常規(guī)顯微鏡下觀察化療后病理形態(tài)學改變的組織學評定。對腫瘤組織病理形態(tài)學觀察的同時結合腫瘤標志物檢測的對照研究綜合評價化療效果是一種新嘗試，我們曾針對新輔助化療對乳腺癌特異性基因(breastcancerspecificgene，BCSGl)的影響進行了研究，發(fā)現(xiàn)BCSGl表達從蛋白質水平和mRNA水平上均受到化療的影響而下降，可作為評價乳腺癌患者化療效果的指標。在此基礎上，本研究擬探究臨床常規(guī)

3、檢測的乳腺癌預后指標對不同化療方案的反應，進而探討其是否能在預測預后的同時指導化療方案的選擇。 VEGF、Bcl-2和PCNA在判斷預后方面的作用已較為肯定，而它們在評價化療效果方面的作用少有人系統(tǒng)研究。有鑒于此，本研究將通過動物實驗首先從大體上觀察不同化療方案對MCF-7乳腺癌移植瘤裸鼠飲食、活動、體重和腫瘤重量變化的影響，綜合分析不同化療方案對乳腺癌移植瘤裸鼠模型的抑瘤作用和影響因素；在此基礎上，采用HE染色、免疫組織化學方

4、法和流式細胞檢測技術結合移植瘤組織病理形態(tài)學，探討VEGF、Bcl-2和PCNA蛋白對乳腺癌不同化療方案效果評價的指導意義和應用價值。最終探討新輔助化療(術前化療)與乳腺癌預后指標間的關系，為指導臨床化療方案的選擇，推行個體化治療尋找新的依據(jù)和思路。 方法：1建立模型和實驗分組：將88只接種乳腺癌MCF-7瘤株并成瘤的裸鼠隨機分為10個化療組和1個對照組，每組8只裸鼠。其中5個化療組按1/3LD10劑量，另5個化療組按2/3LD

5、10劑量分別給予化療方案(CMF、CAF、NP、TP、Xeloda)干預；對照組給予生理鹽水，模擬臨床順序腹腔內(nèi)或口服給藥。2觀察指標及抑瘤作用評價：每日定時觀察記錄荷瘤裸鼠的飲食、活動和體重情況，并測量記錄移植瘤的生長情況，計算抑瘤率，分析在不同劑量強度下各化療方案對MCF-7乳腺癌移植瘤裸鼠模型的抑瘤作用和影響因素，選擇最適宜的劑量強度組進行后期研究。采用HE染色，常規(guī)光學顯微鏡下觀察移植瘤組織化療后病理形態(tài)學變化，并進行病理組織學

6、化療療效分級評價。3免疫組化法和流式細胞術檢測：采用免疫組化SP法和流式細胞術檢測乳腺癌移植瘤組織VEGF、Bcl-2和PCNA蛋白的表達情況，對比分析化療組與對照組之間差異。4相關分析：分析乳腺癌移植瘤組織VEGF、Bcl-2和PCNA蛋白表達與病理組織化療療效分級的關系。5統(tǒng)計分析：采用spss統(tǒng)計軟件(10.0版)，實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)土標準差((x)±s)表示。各項參數(shù)值之間用x2檢驗、spearman等級相關分析。 結果：

7、1荷瘤裸鼠體重，瘤重和抑瘤率：2/3LD10劑量各化療組裸鼠體重明顯低于對照組，均有顯著性差異(P＜0.05)；各化療組瘤重明顯低于對照組，均有顯著性差異(P＜0.05)；抑瘤率分別為83.1％、75.5％、84.6％、87.9％、91.0％。1/3LD10劑量各化療組裸鼠體重均低于對照組體重，均有顯著性差異(P＜0.05)；各化療組瘤重低于對照組，但僅有CMF組與對照組有顯著性差異(P＜0.05)，抑瘤率分別為36.7％、18.0％、

8、20.5％、19.5％、18.0％。結果顯示2/3LD10劑量化療組可較準確反應化療藥物的聯(lián)合作用和對裸鼠的影響，臨床相關性較好，故選擇2/3LD10劑量化療組進入下面的研究。2免疫組化檢測結果：各化療組VEGF陽性標記指數(shù)(1abelingindex，LI)均顯著低于對照組，均有顯著性差異(P＜0.05)，且TP和Xeloda組顯著低于CMF和CAF組(P＜0.05)；NP組顯著低于CAF組(P＜0.05)。各化療組Bcl-2蛋白LI

9、值均高于對照組，CAF、NP、TP和Xeloda與對照組有顯著性差異(P＜0.05)。兩兩比較，TP組較CMF、CAF組顯著增高(P＜0.05)。各化療組PCNA蛋白LI值明顯低于對照組，均有顯著性差異(P＜0.05)，且NP組顯著低于CMF、CAF、TP和Xeloda組(P＜0.05)，TP、Xeloda組顯著低于CMF、CAF組(P＜0.05)。3流式細胞術檢測結果：各化療組VEGF表達熒光指數(shù)(Fluorescenceindex，

10、FI)值與對照組比較均顯著下降，有顯著性差異(P＜0.05)，且NP、TP和Xeloda組顯著低于CAF和CMF組(P＜0.05)，Xeloda組顯著低于NP組(P＜0.05)。各化療組Bcl-2表達FI值與對照組比較顯著升高，均有顯著性差異(P＜0.05)，且TP和Xeloda組顯著高于CMF、CAF和NP方案(P＜0.05)。各化療組PCNA表達FI值較對照組顯著下降(P＜0.05)，且TP和Xeloda組顯著低于CMF、CAF組(

11、P＜0.05)，NP組顯著低于CMF組(P＜0.05)。4VEGF、Bcl-2和PCNA表達與病理學化療療效分級的關系：VEGF蛋白表達在三個療效分級間有顯著性差異(x2=33.216，P＜0.05)；呈顯著正相關(r=0.650，P＜0.05)。Bcl-2蛋白表達在三個療效分級間有顯著性差異(x2=12.542，P＜0.05)；呈負相關趨勢，但無統(tǒng)計學意義(r=-0.306，P＞0.05)。PCNA蛋白表達在三個療效分級間有顯著性差異

12、(x2=12.061，P＜0.05)；呈顯著正相關(r=0.540，P＜0.05)。 結論：1針對乳腺癌MCF-7荷瘤裸鼠的體內(nèi)藥敏試驗，選用2/3LD10劑量進行聯(lián)合化療方案藥敏試驗可較準確地反映化療藥物的聯(lián)合作用和對機體的影響，臨床相關性較好。 2不同化療方案均可降低裸鼠MCF-7乳腺癌移植瘤組織VEGF和PCNA蛋白表達，并增強Bcl-2蛋白表達。其中TP和Xeloda兩個方案對三者表達的影響顯著，而NP僅對VEG