rAAV2-hEndo對(duì)人乳腺癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)和微血管生成的影響.pdf

1、目的：探討2型重組腺相關(guān)病毒為載體的人血管內(nèi)皮抑素基因?qū)θ巳橄侔┞阈∈笠浦擦龅闹委熥饔靡约?型重組腺相關(guān)病毒作為基因載體的可靠性和安全性，為臨床上應(yīng)用血管內(nèi)皮抑素基因治療乳腺癌提供新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：應(yīng)用MCF-7人乳腺癌細(xì)胞株，在15只BALB/C-nu/nu裸小鼠（雌性，4-6周齡）鼠蹊部建立人乳腺癌裸小鼠皮下移植瘤模型。當(dāng)移植瘤長(zhǎng)至平均直徑約4mm時(shí)，將裸小鼠隨機(jī)分為兩組，實(shí)驗(yàn)組10只，對(duì)照組5只。實(shí)驗(yàn)組，于移植瘤

2、病灶局部注射5×109vg2型重組腺相關(guān)病毒為載體的人血管內(nèi)皮抑素基因；對(duì)照組給予同劑量的空病毒。每隔一周重復(fù)給藥一次，共局部給藥三次。每?jī)商旆Q量一次裸小鼠體重，并分別測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)徑和短徑，計(jì)算腫瘤體積，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線以觀察腫瘤生長(zhǎng)的速度和血管內(nèi)皮抑素基因?qū)θ橄侔┞阈∈笠浦擦龅挠绊?。第一次給藥后28天，即接種細(xì)胞后第40天處死全部實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組裸小鼠，收集15例移植瘤的組織標(biāo)本。標(biāo)本的1/4部分行冰凍切片，并于熒光顯微鏡下觀察基因的轉(zhuǎn)

3、染情況。標(biāo)本其余3/4部分行常規(guī)HE染色，觀察腫瘤組織的形態(tài)特征，并行免疫組織化學(xué)標(biāo)記CD31和VEGF，以檢測(cè)腫瘤組織中MVD和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的表達(dá)。分析血管內(nèi)皮抑素對(duì)腫瘤血管生成的影響及其分子作用機(jī)制。應(yīng)用SPSS11．5統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以P<0．05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果： （1）人乳腺癌細(xì)胞MCF-7在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)情況良好，呈典型的上皮細(xì)胞形態(tài)，具有惡性腫瘤生長(zhǎng)的特點(diǎn)。 （2

4、）人乳腺癌裸小鼠皮下移植瘤模型建立，裸小鼠一般狀況良好，接種細(xì)胞10日后，均可于移植部位觸及明顯腫塊，成瘤率達(dá)100％，平均成瘤時(shí)間為8天。 （3）應(yīng)用2型重組腺相關(guān)病毒攜帶的人血管內(nèi)皮抑素基因（rAAV2-hEndo）治療前，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的腫瘤體積無(wú)明顯差別；接受治療第七天后，實(shí)驗(yàn)組的腫瘤體積顯著小于對(duì)照組（P<0．05），且隨治療時(shí)間的延長(zhǎng)兩組腫瘤體積差別逐漸增大；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)抑瘤率為66．09％。 （4）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過(guò)

5、程中，無(wú)一例裸小鼠意外死亡，未發(fā)現(xiàn)裸小鼠有病毒感染癥狀。 （5）熒光顯微鏡下，腫瘤組織中檢見(jiàn)大部分腫瘤細(xì)胞可激發(fā)出黃綠色熒光，提示腺相關(guān)病毒攜帶的血管內(nèi)皮抑素基因轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞。 （6）移植瘤巨檢，實(shí)驗(yàn)組腫瘤體積平均為672．40±232．14 mm3，對(duì)照組腫瘤體積平均為1982．76±257．91mm3，差別有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0．000）；HE染片中，移植瘤呈現(xiàn)典型的人乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的特征。 （7）免

6、疫組化染色結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組MVD計(jì)數(shù)顯著低于對(duì)照組（P<0．05），且實(shí)驗(yàn)組VEGF的表達(dá)亦顯著低于對(duì)照組（P<0．05）；相關(guān)性分析表明，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組MVD與VEGF的表達(dá)均呈現(xiàn)正相關(guān)（均P<0．05，r分別為0．75和0．92）。 結(jié)論： （1）人腫瘤細(xì)胞/裸小鼠系統(tǒng)是較為理想的人體腫瘤異種移植的動(dòng)物模型。 （2）2型重組腺相關(guān)病毒轉(zhuǎn)染率較高，相對(duì)安全，可能成為基因治療腫瘤的理想載體之一。 （3）以